Wako结肠癌造模诱导结肠癌造模诱导剂-偶氮甲烷（Azoxymethane，AOM）

结肠癌造模诱导剂（Wako/Sigma）

偶氮甲烷（Azoxymethane，AOM）

基本描述：

偶氮甲烷（氧化偶氮甲烷），英文Azoxymethane，缩写AOM，可有效诱导大小鼠结肠癌，广泛用作一种基质引起实验动物发生结肠肿瘤，从而研究癌症预防物和癌症形成机制。另外，越来越多结肠癌病例的发生，使得癌症预防物的研究也越来越流行。按照每周一次皮下注射AOM（15mg/kg体重）进入大鼠体内，连续3周给药。数周后能观察到癌前期病变。

作用机制：偶氮甲烷（AOM）能诱导DNA产生O6-甲基鸟嘌加合物，导致G→A转化。

主要应用：偶氮甲烷（AOM）常联合DSS（Mw：36000-50000 Da）注射动物，建立结肠癌模型，用来研究癌症发展机制和化学预防。

基本特征：

1）  CAS NO. 25843-45-2

2）  线性分子式：CH3N=N(→O)CH3【C2H6N2O】

3）  分子量：74.08

4）  纯度：≥98%

5）  结构式：

结肠癌（Colon cancer）模型建立案例：

1、  文献来源：Wirtz S, et al. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nat Protoc. 2007; 2(3):541-6.

1.1    DSS溶液制备（2% DSS溶液）：溶解10gDSS于500ml无菌的饮用水中，使用前溶液保存在4℃，好现配现用。

1.2    AOM溶液制备：用无菌水溶解AOM配制10 mg/ml的储存液，分装后放到-20℃保存，避免反复冻融。使用之前，融化分装母液并用无菌生理盐水1:10倍稀释。

1.3    小鼠结肠炎相关的依赖性结直肠癌造模方法

1）  第1天称重和标记小鼠；

2）  按10 mg/kg体重的剂量腹腔注射AOM溶液；

3）  加DSS溶液灌满小鼠笼内的饮水槽，以5ml DSS溶液/小鼠/天加量，对照小鼠加等体积不含DSS的饮用水；

4）  第3天清空笼子内剩余的DSS饮用水，过两天重新装满DSS溶液；

5）  第5天清空笼子内剩余的DSS饮用水，重新装满DSS溶液；

6）  第8天清空笼子内剩余的DSS溶液，换上不含DSS的无菌水持续14天；

7）  第22-26天重复第3）-5）步；

8）  第29天清空笼子内剩余的DSS溶液，换上不含DSS的无菌水持续14天；

9）  第43-47天重复第3）-5）步；

10）第50天清空笼子内剩余的DSS溶液，换上不含DSS的无菌水；

2、文献来源：Neufert C, et al. An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression. Nat Protoc. 2007; 2(8):1998-2004.

2.1 DSS溶液制备（2.5% DSS溶液）：称取2.5g DSS溶于100ml无菌水，本溶液置于4℃可稳定保存1周。好现配现用。

2.2 AOM溶液制备：用无菌水溶解AOM配制10 mg/ml的储存液，分装后放到-20℃保存，避免反复冻融。AOM在水或生理盐水中的稳定性高于PBS缓冲液，且在玻璃管内稳定性好于塑料管。使用之前，融化分装母液并用无菌生理盐水1:10倍稀释。

2.3 小鼠结肠癌造模方法

1）第1天称重，等数分组并标记小鼠；

2）按照10mg/kg体重的浓度计算所需的AOM量，取适量的AOM储存液（10mg/ml）用无菌生理盐水1:10倍稀释。

3）腹腔注射AOM工作液（剂量10mg/kg体重，则10g体重小鼠注射100ul工作液）到实验组小鼠，同时注射等体积的无菌生理盐水到对照组小鼠。

4）自此步之后，按照两种方法继续实验。若建立自发性肿瘤进展模型，见方案A；若建立慢性炎症驱动的肿瘤进展模型，见方案B。

方案A，自发性肿瘤进展模型

A1，第8天重复步骤1）-3）；

A2，第15天重复步骤1）-3）；

A3，第22天重复步骤1）-3）；

A4，第29天重复步骤1）-3）；

A5，第36天重复步骤1）-3）；【到这步每只小鼠都腹腔注射给药6次】

A6，第一次注射后的3个月评估癌前病变，此时不需处死动物。

A7，第一次注射后的6个月评估肿瘤发展。

方案B，慢性炎症驱动的肿瘤进展（Chronic inflammation-driven tumor progression）

B1，制备2.5%（wt/v）DSS溶液。此浓度的DSS能让FVB/N小鼠和其他品系产生良好的造模效果。

B2，按3天的用量加DSS溶液灌满小鼠笼内的饮水槽，以5ml DSS溶液/小鼠/天用量，对照小鼠加等体积不含DSS的饮用水；

B3，第4天清空饮水槽内残留DSS溶液，并且重新灌满另2天所需量的新鲜DSS溶液。

B4，第6天清空饮水槽内残留DSS溶液，并且重新灌满另2天所需量的新鲜DSS溶液。

B5，第8天清空饮水槽内残留DSS溶液，并且重新灌满灭菌水。

B6，第22-29日重复步骤B1）-B5）。

B7，第40日评估癌前病变，此时不需处死动物。

B8，第53-60日重复步骤B1）-B5）。

B9，第80日评估肿瘤发展。

2.4 AOM诱导肿瘤图示（图1）

图1.内窥镜肿瘤调研。通过迷你腔镜监测AOM诱导的肿瘤形成情况。a）还能用于纵向研究；b）对于肿瘤负荷分析，每只小鼠的肿瘤大小按照预设的时间点记录并做总和。

Azoxymethane（AOM）订购信息：欢迎来电咨询，021-50837765  18301939375

DSS（Mw：36000-50000 Da）

动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学(包括新药筛选)研究。人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在道义上和方法上也受到限制。而借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便，更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。