Wako 292-81101生物制药残留DNA提取试剂盒（碘化钠法）
生物制药残留DNA提取试剂盒（碘化钠法）残留DNA提取试剂盒遵照中国药典记载的碘化钠法，适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提取。
残留DNA提取试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA，回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90 min。提取的DNA可以通过qPCR进行定量。
◆特点
● 遵照中国药典登载的碘化钠法*1
● 高回收率
● 单管操作（无需换管） ，耗时仅60-90 min
● 不需要苯酚和氯仿等有机溶剂
● 兼容多种DNA
*1 为使DNA检测方法与国际标准保持同步，中国药典（The Chinese Pharmacopoeia）宣布建立残留细胞DNA检测国家标准。碘化钠法将作为残留DNA提取方法，被新增至2020版的中国药典中。
◆原理
1. 使样品中的蛋白质和脂质溶于碘化钠和N-月桂基肌氨酸钠；
2. 异丙醇与糖原选择性地共沉淀DNA。
◆使用方法
方法1
方法2
◆应用实例
DNA spiking test（加标回收实验）
 |
 |
 |
■ 实验方案
方案1：血清中DNA 提取操作步骤
试剂准备：
1） DNA 提取之前，试剂提取如下：
26 ml 碘化钠溶液加入6 ml 蒸馏去离子水稀释，
再加入1 ml 月桂酰肌氨酸钠和65 μl 糖原溶液并混合均匀。
2） 向洗涤溶液（B）加入2 μl 糖原溶液并立即混合均匀。
注意事项：
1） 用于稀释Nal 溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。
2） 配制好的洗涤溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液（B），加入糖原溶液到无菌离心管中至合适体积即可。
3） 在保存期间Nal 溶液会结晶，加热溶液至50℃可帮助溶解。
DNA 提取步骤：
1） 吸取100 μl 的血清样品加入1.5 ml 微量离心管；
2） 再加入300 μl 配制好的Nal 溶液至离心管并混合均匀；
3） 将离心管在60℃恒温容器中加热15 分钟；
4） 取出离心管，加入400 μl 异丙醇至离心管并混合均匀；
5） 离心管在室温静置15 分钟后离心10,000 g 15 分钟；
6） 尽可能多地吸取上清液，将离心管倒置在纸面上除去残留溶液；
7） 加入1 ml 配制好的洗涤溶液（B）重悬浮得到的白色沉淀，并使白色沉淀从离心管壁上弹开；
8） 短暂离心10,000 g 5 min，去除上清液，将剩余沉淀真空干燥，用于后续的DNA 分析。
方案2: Threshold* 系统DNA定量法的预处理
试剂预处理:
1） 将65 μl 糖原溶液加入26 ml 碘化钠溶液；
2） 将2 μl 糖原溶液加入40 ml 洗涤溶液（B），立即混合均匀。
注意事项：
1） 用于稀释碘化钠溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。
2） 配制好的洗涤溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液（B），加入糖原 溶液到无菌离心管中至合适体积即可。
3） 在保存期间碘化钠溶液会结晶，加热溶液至50℃可帮助溶解。
4） 提取步骤应在DNA 变性之前，因此重要的是使用无菌技术尽可能降低DNA 污染。预先包装好的无菌吸管、无菌试管和手套都要经过此步骤。
DNA 提取步骤：
1） 吸取400 μl 或500 μl 的样品加入2 ml 无菌带盖微量离心管并混合均匀；
2） 吸取20 μl 的月桂酰肌氨酸钠溶液加入微量离心管并混合均匀；
3） 再加入500 μl 包含糖原的碘化钠溶液至混合溶液，涡旋后在40℃保温15 分钟；
4） 加入900 μl 异丙醇至混合溶液，涡旋后静置于室温15 分钟；
5） 短暂离心10,000 g 15 min 后，能看见管壁有白色沉淀，吸取上清液后将离心管倒置于纸面去除残留溶液；
6） 加入800 μl 洗涤溶液（A）至离心管，剧烈涡旋使白色沉淀从离心管壁上弹开；
7） 短暂离心10,000 g 5 min 后，去除残留溶液；
8） 加入1500 μl 包含糖原的洗涤溶液（B）至离心管并涡旋，短暂离心10,000 g 5 min 后吸取上清液，剩余的白色沉淀包括DNA 和糖原载体；
9） 加入分析用缓冲液(Zero Calibrator buffer) 使白色沉淀溶解，用于后续的DNA 分析。
DNA Extractor™ Kit可以高产量提取残留DNA，甚至少量残留DNA。
■ 试剂
|
1．试剂盒组分：
1）碘化钠溶液 1 x 26 ml
2）月桂酰肌氨酸钠 1 x 1.2 ml
3）洗涤溶液（A） 1 x 42 ml
4）洗涤溶液（B） 2 x 40 ml
5）糖原溶液 1 x 0.1 ml
|
2．必需的试剂和仪器：
试剂：
1）异丙醇（特级） 40 ml
2）蒸馏去离子水 6 ml
仪器：
1）微型离心机（Max. 12,000 g）
2）有盖微量离心管（1.5 or 2 ml）
3）旋涡混合器
|
■ 保存
2 – 10℃，试剂盒的保存期为2 – 3 年。
◆试剂盒构成
| 产品编号 | 内容物 | 内容量 |
| 299-81111 | 碘化钠溶液, CP | 26 mL |
| 296-81121 | N-月桂酰肌氨酸钠溶液, CP | 1.2 mL |
| 293-81131 | 洗净液A, CP | 42 mL |
| 290-81141 | 洗净液B, CP | 40 mL |
| 297-81151 | 糖原溶液, CP | 0.1 mL |
备注：每种成分不单独出售
◆产品列表
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| 292-81101 | 残留DNA提取试剂盒（碘化钠法） DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method (Sodium Iodide Method) |
50 tests |
温馨提示：不可用于临床治疗。
| Wako DNA Extractor®提取试剂盒产品选择 | ||||||||
| 样本 | 全血 | 血清 | 血浆 | 组织 | 石蜡包埋组织切片 | 生物制药 | 培养细胞 | 头发、指甲、血迹、唾液 |
| 基因组DNA | DNA Extractor ® WB Kit DNA Extractor ® WB-Rapid Kit |
DNA Extractor ® WB Kit | DNA Extractor ® SP kit DNA Isolator PS-Rapid Reagent |
DNA Extractor ® WB Kit | DNA Extractor ® FM kit | |||
| 线粒体DNA（mt DNA） | mtDNA Extractor ® WB Kit |
mtDNA Extractor® WB Kit | mtDNA Extractor ® CT Kit |
|||||
| 游离DNA | DNA Extractor ® SP kit | DNA Extractor ® SP kit | ||||||
| 低氧化程度的DNA | DNA Extractor ® WB Kit | DNA Extractor ® TIS kit | DNA Extractor ® TIS kit | |||||
| 细菌基因组DNA | DNA Extractor ® kit | DNA Extractor ® kit | ||||||
| 病毒DNA | DNA Extractor ® kit | |||||||
| DNA Extractor® 系列产品列表 | ||||||||
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 样品类型 | 原理 | 特点 | 试剂盒组成 | ||
| 生物制品中的残余DNA提取 | ||||||||
| 295-50201 | DNA Extractore® Kit Wako 生物制药残余DNA抽提试剂盒 |
50次 | 生物制药 血清 |
碘化钠法 | 生物制品中的残余DNA提取 | 碘化钠溶液 月桂酰肌氨酸钠溶液 洗涤液(A) 洗涤液(B) 糖原溶液 |
26ml×1 1.2mL×1 42mL×1 40mL×2 0.1mL×1 |
|
| 血清和血浆中的DNA提取 | ||||||||
| 296-60501 | DNA Extractor® SP Kit 血清血浆中DNA抽提试剂盒 |
50次 | 血清和 血浆 |
碘化钠法 | 1、高灵敏度仅需100 μL血清或血浆样品，高DNA产量; 2、整个提取过程在单独的离心管中，无交叉污染; 3、特别配制的乙醇能完全去除血液中的脂质 |
酶反应液 蛋白质消化液 碘化钠溶液 乙醇溶液 洗涤液(A) 洗涤液(B) |
10ml×1 25μL×1 15mL×1 30mL×1 50mL×1 50mL×1 |
|
| 人和动物组织中的DNA提取（用于8-羟基脱氧鸟苷检测） | ||||||||
| 296-67701 | DNA Extractor® TIS Kit 人和动物薄壁组织中尿8-羟基脱氧鸟苷DNA抽提试剂盒 |
50次 | 组织培养 细胞 |
碘化钠法 | 1、用于8-羟基脱氧鸟苷(氧化应激标志物）检测和鉴定； 2、抗氧化剂阻止更进一步的DNA氧化 |
裂解液 酶反应液 蛋白酶溶液 蛋白消化液 氧化抑制剂 碘化钠溶液 乙醇溶液 PEG溶液 |
75mL×2 15ml×1 50μL×1 750μL×1 350μL×1 15mL×1 30mL×1 20mL×1 |
|
| 全血中的DNA提取 | ||||||||
| 291-50502 | DNA Extractor® WB Kit 全血DNA抽提试剂盒 |
50次 | 全血 组织 培养细胞 |
碘化钠法 | 1、高DNA回收率; 2、整个提取过程在单独的离心管中，无交叉污染 |
裂解液 酶反应液 碘化钠溶液 洗涤液(A) 洗涤液(B) 蛋白酶 |
65ml×2 10mL×1 15mL×1 50mL×1 50mL×1 10mg×1 |
|
| 297-54801 293-54803 |
DNA Extractor® WB-Rapid Kit 全血DNA抽提试剂盒 |
20次 200次 |
全血 | 比DNA Extractor® WB Kit实验步骤更少、提取时间更短(30分钟以内)。 | 裂解液 酶反应液 洗涤液 蛋白酶溶液 |
20次反应 10mL×1 0.8mL×1 20mL×1 40μL×1 |
200次反应 50mL×1 8mL×1 70mL×3 400μL×1 |
|
| 石蜡包埋组织的DNA提取 | ||||||||
| 295-52401 | DNA Isolator PS Kit 石蜡包埋组织DNA抽提试剂盒 |
100次 | 石蜡包埋 组织 |
酶反应液 酶激活剂 蛋白酶 DNA沉淀促进剂 DNA稀释剂 |
2ml×1 34mg×1 2.2mg×1 0.5mL×1 0.5mL×1 |
|||
| 291-56401 | DNA Isolator PS-Rapid Reagent 石蜡包埋组织DNA抽提试剂盒 |
100次 | 石蜡包埋 组织 |
煮沸法 | DNA提取溶液 | 10mL×5 | ||
| 全血中线粒体DNA提取 | ||||||||
| 293-54401 | mtDNA Extractor® WB Kit 全血中线粒体DNA抽提试剂盒 |
25次 | 全血 | 碘化钠法 | 全血中线粒体 DNA提取可在90分钟内完成 | 白血球提取溶液 DNA提取溶液| DNA提取溶液||（A） DNA提取溶液||（B） DNA提取溶液||| 碘化钠溶液 洗涤液 |
5.0ml×1 26.5ml×1 1.3ml×1 1.3ml×1 1.9mL×1 7.5mL×1 50mL×1 |
|
| 培养细胞和组织样品中的线粒体DNA提取 | ||||||||
| 291-55301 | mtDNA Extractor® CT Kit | 25次 | 组织 培养细胞 |
碘化钠法 | 培养细胞和组织样品中的线粒体 DNA提取 |
匀浆液援冲液 DNA提取溶液| DNA提取溶液||（A） DNA提取溶液||（B） DNA提取溶液||| 碘化钠溶液 洗涤液 |
25.0ml×1 1.3ml×1 1.3ml×1 1.3ml×1 1.9mL×1 7.5mL×1 50mL×1 |
|
| 法医学调查的DNA提取 | ||||||||
| 295-58501 | DNA Extractor® FM Kit 法医学研究DNA抽提试剂盒 |
50次 | 头发 指甲 血迹 唾液 |
碘化钠法 | 在几十分钟内可溶解多种毛发 | 裂解液 酶激活试剂（EAR) 再水化液 蛋白酶 碘化钠溶液 洗涤液（A） 洗涤液（B） |
9.5ml×1 80mg×1 0.5ml×1 10mg×1 12.5mL×1 50mL×1 50mL×1 |
|
| 上述试剂仅供实验研究用，不可用作“医药品”、“食品”、“临床诊断”等。 | ||||||||