细胞膜染料–DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS

产品描述

**DiR碘化物的发射波长肉眼不可见，所以需要配备CCD镜头或其他的近红外检测仪器。

Di系列染料想必大家一定不陌生，我们做细胞膜染色的时候经常会用到，今天给大家介绍下常见的4类Di染料：DiI, DiO, DiD 和 DiR，Di系列染料是一类环境敏感型亲脂性膜染料，这类探针在进入细胞膜之前荧光非常弱，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质）结合时，其荧光强度显著增强。一旦应用于细胞中，这类染料会在细胞内质膜中逐步扩散，在其最佳浓度条件下，可以扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。

 

DiI, DiO, DiD 和 DiR被激发后可以发出不同颜色的荧光，DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。

 

DiO、DiI、DiD、DiR的光谱图

 

DiO, DiI, DiD 和 DiR几种染料的异同：

 

其中I、D、R分别代表了一个，两个，三个双键，它们是决定波长长度的关键，DiO, DiI, DiD 和 DiR这几款染料的结构式如下：

 

DiO, DiI, DiD 和 DiR几种染料的异同：

 产品优点：

1. 应用广泛：主要作用是标记细胞膜，用于活的或固定的神经元等细胞或组织的长期示踪剂，同时还可以标记其他疏水结构，例如外泌体

2. 不会影响细胞的生存力

3. 体外培养的条件下可以存活很长时间

4. 在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为 0.2-0.6mm/day

5. 在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为 6mm/day

关于染料的使用技巧：

1.DiI 可以溶解于无水乙醇、DMSO 和 DMF，溶解度约为 1-2.5mg/ml，发现较难溶解时可以适当用超声处理以促进溶解。

2.用于细胞膜荧光标记时，DiI 的常用浓度为 1-25μM，最常用的浓度为 5-10 μM。

3. DiI 可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为 5-20 分钟。

4. 染固定的细胞时，通常使用 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

Di家族荧光染料选择小tips：

DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织（请您根据您的需求选择相应的探针），DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR（D12731）波长更长，更适合组织染色；

DiR应用实列赏析：

源文献：Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model Journal: Scientific Reports (2017)

使用方法
1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS细胞膜染色液制备
(1)配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
注意：未使用的储存液保存在-20 oC，避免反复冻融。
(2)工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1～5 µM的工作液。
注意：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找佳条件。
2. 悬浮细胞染色
(1)悬浮细胞密度为 1 × 106/mL加入到工作液中。
(2)在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞佳培养时间不同。
(3)染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。
(4)倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。
(5)重复(3)，(4)步骤两次以上。
3. 粘壁细胞的染色
(1)使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞佳培养时间不同。
(5)吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
(1)DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
(2)多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI和DiO=Omega XF52，Chroma 51004;
b) DiI和DiD=Omega XF92，Chroma 51007;
c) DiI，DiO和DiD=Omega XF93，Chroma 61005
5. 流式细胞仪的检测
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。

储存条件：DiR碘化物-20℃干燥避光保存，有效期一年。

细胞膜荧光探针DiR，碘化物

DiR iodide [1，1-dioctadecyl-3，3，3，3-tetramethylindotricarbocyanine iodide]