4×SDS-PAGE单色蛋白Loading buffer(含巯基还原剂)品牌:JinPan | 货号:JP-8156-10ml
SDS-PAGE Loading buffer,4×(with β-Mercaptoethanol)
【保存条件】
建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期 1 年
【概述】
4×SDS-PAGE 单色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在 SDS-PAGE 运行期间防止 pH 值变化。一些蛋白质对在 Tris 缓冲液中电泳期间温度波动引起 的 pH 变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在 SDS-PAGE 电泳之前的样品加热过程中 以及电泳过程中蛋白质降解。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS 还 可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。β-巯基乙醇可以断开 半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。
溴酚蓝作为指示剂,用于追踪电泳进度。
【使用建议】
1. 室温解冻 4×SDS-PAGE 单色蛋白上样缓冲液。
2. 请按每 30μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液的比例(4 倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度 过高,可用双蒸水稀释。
3. 混匀后,100℃水浴加热 5-10 分钟,使蛋白变性。
4. 冷却至室温后,10000-14000rpm 离心 2-5 分钟,取上清直接上样电泳即可。
【注意事项】
1. β-巯基乙醇对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护。
2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为 8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在 30kd 左右, 胶浓度为 12时,约在 20kd 左右,胶浓度为 15%时,大概在 10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。
4. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂,PH 值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液 可能会呈现深棕色,不影响产品使用。
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