GO3000 HiTrans转染试剂1ml品牌：JinPan | 货号：EK-5401-1ml
GO3000 HiTrans Reagent
【保存条件】
-20ºC 保存 2 年
【概述】
1. Ecotop 品牌高效转染试剂（GO3000 HiTrans Reagent），适用于真核哺乳动物细胞转染，有毒性低、转
染效率高等特点。
2. 适用于：293T/293A/HEK293/CHO/Hela 等哺乳动物细胞，转染效率可高达 90%以上。通常 293 细胞转
染效率可以高达 90%以上。大多数常见的细胞例如 Hela 细胞、CHO 细胞等也都适合用该试剂转染，
但效率比 293 细胞要略低一些。
3. 应用：细胞瞬时转染、慢病毒包装、腺病毒包装、AAV 病毒包装、逆转录病毒包装
4. 本试剂经过 0.22μm 过滤器除菌处理，可直接使用。
【操作方法】
1. 对于贴壁细胞（以下均以 6 孔板为例，其它培养皿或培养板请根据相应面积换算）：
a. 将细胞培养于培养皿或培养板内，通常在铺板后 1-2 天内长到 70-90%。
b. 在转染前 1-2 小时，吸去细胞培养液，更换为新鲜的不含抗生素的完全培养液 2ml。
c. 取 2-4μg 待转染的质粒 DNA (质粒总体积不宜超过 20μl，若有多种质粒请混匀)，以质量体积比 1：3 加
入转染试剂 6~12μl（如 2μg 待转染的质粒 DNA 加入转染试剂 6μl）。
d. 混匀后，室温孵育 3-5 分钟。
e. 把 DNA-转染试剂混合物中加入 500μl opti-MEM（若无 opti-MEM 可使用无血清无双抗的 DMEM 或 1640，
具体根据转染细胞使用的培养基）,充分混匀后静置 10-15 分钟。
f. 后均匀滴加到整个 6 孔板内（加入前吸出原培养板中 500μl 培养基），并置于含 5%二氧化碳的 37ºC 细胞
培养箱内培养。
g. 在转染后 4-6 小时左右换液，更换为 2ml 新鲜的完全培养液，继续培养。
h. 通常在转染约 24-48 小时后就可以检测到转染基因的表达。
2. 对于悬浮细胞：www.ecotopbio.com
a. 离心收集悬浮细胞，用 PBS 洗涤一次。
b. 按照上面的步骤 c)、d)、e）制备 DNA-转染试剂-optiMEM 混合物。
c. 每 106 个细胞的沉淀，用 500 微升 DNA-转染试剂-optiMEM 混合物重新悬浮，室温放置 15-20 分钟。
d. 在一个 6 孔板孔内加入 1.5ml 完全培养液，然后加入来自上一步的细胞-500 微升 DNA-转染试剂-optiMEM
混合物，混匀。
e. 在含 5%二氧化碳的 37ºC 细胞培养箱内培养。
f. 根据实验要求和转染试剂对于不同细胞的毒性不同，在 4-6 小时后离心收集细胞，用 PBS 洗一次，然后
用 2 毫升完全培养 液重新悬浮细胞，继续培养。
g. 通常在转染约 24-48 小时后就可以检测到转染基因的表达。
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