DNA凝胶回收试剂盒50T品牌：JinPan | 货号：EK-1101-50T
从各种浓度的琼脂糖凝胶中回收70bp-100Kbp DNA片段
产品组成
产品介绍
本试剂盒采用可高效、专一结合 DNA 的硅基质材料和独特的缓冲液系统，可从各种浓度的 TAE 或
TBE 琼脂糖凝胶上回收 70bp-10kbp 大小的 DNA 片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子
及寡核苷酸引物等杂质，回收率可达 80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的 DNA 量为 20μg。使用本
试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
存储条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存 12 个月，更长时间的保存可置于 2-8℃。2-8℃
保存条件下，Buffer QG 可能产生沉淀，使用前可在 55℃水浴中预热 10 min 以溶解。
需要额外准备的材料
□ 无水乙醇（96%-100%）
□ 无菌 1.5ml 离心管
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
□ 电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
□ 如下一步实验要求较高，核酸电泳时则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。
□ 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对 DNA 造成损伤。
□ 如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测 pH 值，如 pH 值大于 7.5，可向含有 DNA 的胶溶液中加
10-30µl 3M 醋酸钠（pH5.2）将 pH 值调到 5-7 之间。
□ 回收<70bp 或>10kb 的 DNA 片段时，应加大 Buffer QG 的体积，延长吸附和洗脱时间。
□ 回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。
□ 高温及潮湿等不利环境因素对吸附柱产生影响，请将吸附柱储存于阴凉干燥的环境中。
开始前试剂准备
□ 按瓶子标签所示，加入 4 倍体积的无水乙醇稀释 Buffer PW，于室温密封保存。
□ 确认 Buffer QG 溶液显示为黄色。
DNA 浓度及纯度检测
回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链DNA。
OD260/OD280 比值应为 1.7-2.0，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用 ddH2O 比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
操作步骤：
1. 配制所需浓度的琼脂糖凝胶，电泳分离 DNA 片段。当 DNA 片段分离后，将凝胶置于紫外灯下，用干净锋利的手术刀快速切下含目的片段大小的 DNA 凝胶。为避免 DNA 片段受到损伤，应尽量减少凝胶的紫外照射时间，切胶时应尽量切去多余凝胶。
2. 放入 1.5ml 离心管中并称取凝胶块的重量，加入 3 倍体积的 Buffer QG（如凝胶称重结果为 100mg，则其体积约等于100µl，应加入 300µl Buffer QG）。对于>2%的琼脂糖凝胶，添加 6 倍体积的 Buffer QG。
3. 50℃水浴 10min（或直至凝胶完全溶解即可），水浴期间可颠倒混匀加速溶胶。
注意：若回收<300bp 的 DNA 片段可在完全溶胶后加入一倍凝胶体积的异丙醇以提高回收率；胶块
完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合 DNA 能力较强。
4. 凝胶完全溶解后，检查颜色是否为黄色（类似于没有溶解琼脂糖的 Buffer QG）。如果混合物的颜色为橙色或紫色，则加入 10µl 3 M 醋酸钠(pH 5.0)并混合，混合物的颜色会变成黄色。DNA 吸附到膜上仅在 pH ≤ 7.5 时有效。Buffer QG 含有一种 pH 指示剂，在 pH ≤7.5 时为黄色，在较高 pH 时为橙色或紫色，可通过颜色轻松确定 DNA 结合的最佳 pH。
5.（选做）向上述溶胶液中加入 1 倍凝胶体积的异丙醇并混合。例如，如果琼脂糖凝胶切片为 100mg，则添加 100µl 异丙醇。此步骤增加了≤500bp 和≥4 kb 的 DNA片段的产量。对于 500bp-4kb 之间的 DNA 片段，添加异丙醇对产量没有影响。
6. 将吸附柱套在 2ml 收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g(≥10,000 rpm)离心 30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。吸附柱最大容量为 700µl，若样品体积大于 700µl，可分批加入；为提高回收率，可短暂离心用于溶胶的 1.5ml 离心管后再将溶液转移如吸附柱。
7. 向吸附柱中加入 500µl Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心 30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果回收的 DNA 是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入 Buffer PW后静置 2-5min 后再离心。
8. 重复操作步骤 7 一次
9. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心 2min 以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱套入新的1.5ml 离心管中并于室温开盖放置 5-10min 彻底晾干。注意：Buffer PW 中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。
10. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加 30-50µl Buffer EB，盖上盖子室温静置 2min 后，最大转速 (~13,400×g)离心 2min 收集 DNA 溶液并置于-20℃保存。
注意：洗脱体积不应小于 30μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用 ddH2O 做洗脱液，并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率。为了提高 DNA 的回收量，可重复操作步骤 10 一次。
常见问题：
1.回收效率低
凝胶未充分溶解:溶胶时，50~55℃水浴 10min，其间颠倒混匀数次，让凝胶充分溶解。
凝胶用量过多:过量的凝胶会降低回收率，切胶时尽量去除多余的凝胶。
溶胶液不足：3 倍体积的 Buffer QG 是为了保证在各种浓度的琼脂糖凝胶中都能有较好的回收率，尽量不要节省。
洗脱不充分：建议用 Buffer EB 洗脱两次，以获得最高的回收率，洗脱液必须加入柱子的膜中央。
试剂准备有误：Buffer PW 没有加入乙醇稀释或体积不准确(乙醇浓度需控制在 80%)。
2. 回收后出现杂带
DNA 变性：有些 DNA 片段对温度比较敏感，杂带有可能是单链的 DNA。降低溶胶温度至 37~50℃。降低温度，
可延长溶胶时间至 20~40min 让凝胶充分溶解。
3. 盐污染
A260/230 太低：Buffer QG 溶液中的异硫氰酸胍在 A230 中有较高的吸收峰。使用该产品，A260/230 通常小于 1.0。
实验表明，该产品得到的 DNA 不会影响下游的运用，包括测序，连接，定量 PCR，PCR，酶切等。
4. 连接不理想
乙醇污染：洗脱 DNA 前，打开柱子的盖子，空气干燥 10~15min 以彻底去除乙醇。
核酸变性：降低溶胶温度至 37~50℃。降低温度，可延长溶胶时间至 20~40min 让凝胶充分溶解。降低温度能有
效减少核酸的脱嘌呤和变性的影响。
本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。