NewZOL LS 总RNA提取试剂(NewZOL LS Reagent) 200ml品牌：JinPan | 货号：EK-5303-200ml
功能与使用方法与life品牌的Trizol LS相似
【保存条件】
2-8℃长期保存
【操作方法】
I. 样本处理
1. 组织样本处理：用匀浆器或其他类似设备匀化组织样本机械破坏装置，每 500μL 最多使用 50 mg 组织NewZOL LS。 对于 DNA 含量高的组织（例如脾脏），建议使用 25 mg 组织/ 500μL 试剂。
2. 贴壁细胞样本处理：除去细胞培养基，通过向培养皿（直径 3.5 cm，10 cm2）中加入至少 1 mL NewZOLLS 并通过反复吸移来确保完全裂解。（根据培养皿面积而不是细胞数计算试剂量。试剂量不足将导致分离的 RNA 受到 DNA 污染。残留的匀浆可以在-20 至-80°C 下保存至少一年，以备后用。）
3. 悬浮细胞样本处理：沉淀细胞，并通过添加 NewZOL LS 直接裂解。 每 5×106个细胞至少加入 500μLNewZOL LS，移液器吹打数次裂解细胞。（添加 NewZOL LS 之前请勿洗涤细胞，细胞洗涤可能会导致 RNA降解。）
4. 液体样本处理：每 200μL 液体样品中加入 500μL NewZOL LS 进行均质化和裂解。对于小于 200μL 的样品体积，请添加 500μLNewZOL LS 并加水至最终体积为 700μL。
5. 富含脂质样本处理：如上所述均质化富含脂质的样品。将样品以 12,000×g 离心 5 分钟。 离心后，样品顶部会出现一层脂肪。用移液器吸头尖端刺穿上层，然后将上清液转移到新管中。
II. RNA 提取
1. 每使用 500μLNewZOL LS 的裂解液中加入 200μL 无 RNase 的水至裂解液中。剧烈摇动样品 15 秒钟。在室温下孵育 5 分钟。（对于包含 50 mg 组织/ 500μL NewZOL LS 的样品，建议在室温下孵育 15 分钟。）
2. 在室温下以12,000×g离心样品15分钟。含有DNA，蛋白质和多糖的半固体沉淀物形成在试管底部。RNA仍溶解在上清液中。
3. 将 500μL 上清液转移至新管中。 勿吸太干净防止污染，在 DNA /蛋白质沉淀上方保留一小部分上清液。
（含有 DNA，蛋白质和多糖的沉淀物占匀浆-水混合物总量的约 10％。）
4. 加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀以沉淀 RNA，在室温下孵育样品 10 分钟。
5. 将样品以 12,000×g 离心 10 分钟，除去并丢弃上清液。通常，在管的底部以白色沉淀的形式获得 RNA。对于脾脏样品，RNA 在试管底部形成凝胶状膜。用乙醇洗涤后，膜变得更可见。
6. 加入 500μL 75％ 乙醇（无 RNase 水配制）洗涤，轻弹管底使沉淀悬浮，上下颠倒混匀。对于较大的试管，按比例添加 75% 乙醇溶液。
7. 将沉淀以 8,000×g 的速度离心 3 分钟。移液去除沉淀中的乙醇，重复乙醇洗涤步骤一次。静置 5-10 分钟待乙醇挥发，无需过份干燥成固体，干燥成固体的 RNA 沉淀不易溶解
8. 将 RNA 沉淀溶于无 RNase 的水中，在室温下涡旋 3 分钟，以实现有效溶解。将得到的 RNA 进行检测或-65℃长期保存（若需更长时间保存请添加适量 RNA Chill（JP-8520））。
【注意事项】
1. RNA 酶污染注意事项：
a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理：玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ，塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌，吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管
b. 佩戴手套及口罩及护目镜：皮肤上常含有细菌和霉菌，可污染 RNA 制备，且同时是 RNA 酶来源，同时 New ZOL LS 对皮肤有一定毒性，建议佩戴手套及口罩及护目镜。
c. 尽量于通风橱内提取：避免吸入提取过程中有毒物质。
2. 安全性问题：
a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性，可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量水冲洗。
如感到身体不适，应立即就医
本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。