通用型DNA纯化回收试剂盒品牌：genefist | 货号：GF214-03 
储存条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存18个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。
产品简介及特性
本试剂盒采用独特的缓冲液体系和离心吸附柱，既能从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收100 bp-20 kb大小的DNA片段，又能用于直接纯化PCR产物，满足多种实验需要。整个纯化过程可在15分钟完成、不需进行苯酚萃取及酒精沉淀、纯化的DNA无盐类或大分子的污染。
如果回收前DNA量为1-5ug，建议选用超薄DNA产物纯化试剂盒GF203或超薄琼脂糖凝胶回收试剂盒DF208，推荐洗脱液体积20-50ul。
a.使用相同的溶液，可进行三种不同的应用（PCR 产物纯化、DNA 产物纯化、胶体回收）。
b.每一离心管柱可处理达 150ul 的 DNA 溶液或 PCR 反应产物，DNA 回收率可达 80%~95%。
c.可用于以 TAE 或 TBE 缓冲液配制的琼脂糖凝胶的 DNA 回收，DNA 回收率可达 60~90%。
注意事项
1.电泳时应使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2.如下一步实验要求较高，则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。
3.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对 DNA 造成损伤。
4.洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定：如回收前DNA只有1-5μg左右（推荐选用GF203或GF208超薄型试剂盒），加20-50μl洗脱液；如回收前有5-15μg左右DNA，加30-100μl洗脱缓冲液；如回收前有15-30μg左右DNA，加50-300μl洗脱缓冲液。
5.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。
6.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。
操作步骤
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
一、从 PCR 反应液或酶切反应液中回收 DNA
1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后，移取反应混合液（含有预纯化的 DNA）至干净的离心管。
2.加入 3 倍体积的溶液 PC 至反应混合液中（如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液）,震荡混合均匀。
3.将吸附柱放入收集管中，移取上一步混合液至吸附柱，室温放置 2 min，以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，丢弃收集管中的悬液，将吸附柱 CB1 放回收集管中。
注意：若样本体积超过 700ul，可分次加入并重复此步骤。
4.加入 700ul 的漂洗液至吸附柱中，静置 1 分钟以平衡管柱膜，于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，丢弃悬液，将吸附柱 CB1 放回收集管中。
5.重复操作步骤 4。
6.将吸附柱 CB1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟，将吸附柱开盖置于室温放置数分钟，以去除、晾干残余的漂洗液。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR 等实验
7.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液 TB，室温放置 2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。
注意：洗脱体积不应小于 30 μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响，若后续做测序，需使用 ddH2O 做洗脱液，并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20°C，以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，将 DNA 溶液收集到离心管。
二、从琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段
1.完成电泳后，将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量（如果凝胶重为 0.1 g，其体积可视为 100 μl）。
2.向胶块中加入 2 倍体积（如果琼脂糖凝胶浓度＞2%，则加入 3 倍体积）的溶液 PC，60℃水浴孵育 5-15 min或更久，其间不断温和地上下翻转离心管，直至胶块充分溶解（若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）。
注意：胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。
3.将吸附柱放入收集管中，移取上一步溶胶液至吸附柱，以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，丢弃收集管中的滤液，将吸附柱 CB1 放回收集管中。
注意：若样本体积超过 700ul，可分次加入并重复此步骤。
4.可选步骤：向吸附柱 CB1 加入 400ul 的溶液 PC，以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，丢弃收集管中的滤液，将吸附柱 CB1 放回收集管中（此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶，以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象）。
5.向吸附柱加入 700ul 的漂洗液，静置 1 分钟以平衡管柱膜，于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，丢弃滤液，将吸附柱 CB1 放回收集管中。
6.重复操作步骤 5。
7.将吸附柱 CB1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟，将吸附柱开盖置于室温放置数分钟，以去除、晾干残余的漂洗液。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR 等实验。
8.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱液 TB，静置 2 分钟，室温放置 2 min，12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。
注意：洗脱体积不应小于 30 μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响，若后续做测序，需使用 ddH2O 做洗脱液，并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，将 DNA 溶液收集到离心管。
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