酵母基因组DNA提取试剂盒品牌：genefist | 货号：GF307 
选配试剂
RNase A (100 mg/ml)目录号：GF020-01
储存条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存18个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。
产品简介
本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱，和独特的缓冲液系统，能高效、专一吸附 DNA，可有效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取酵母细胞中的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂，安全方便；提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。
菌体浓度检测
可采用分光光度计或平板培养法检测菌体量，一般对于酿酒酵母，OD600值为1.0时，相当于1-2×107cells / ml。
注意事项
1.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。
2.若溶液 GA 或溶液 BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
3.所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
需要自备的试剂
1.溶壁酶 Lyticase（目录号：GF0210-01）
2.山梨醇 buffer：
用0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.4)配制1.2 M山梨醇;
0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.4)的配制：77.4 ml 0.1 mol/L Na2HPO4+ 22.6ml 0.1mol/L NaH2PO4
操作步骤
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1.取酵母细胞（最多不超过5×107 cells），12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2.酵母细胞壁的破除：
酶法：向菌体中加入600 μl山梨醇buffer，加入大约200 U Lyticase（客户自备，目录号：GF1203-01），充分混匀。30℃处理30 min。4000 rpm(~1500×g)离心10 min，弃上清，收集沉淀。
注意：以上为5×107酵母细胞的Lyticase用量，根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同，所用Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整。
3. 向沉淀中加入200 μl溶液GA重悬沉淀，充分混匀。
如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：GF020-01），振荡15 sec，室温放置5 min。
4.加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。
5.加入200 μl溶液BG，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取的DNA不纯。
6.加入 200ul 无水乙醇，充分振荡混匀 15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
7.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放回收集管中。
8.向吸附柱 CG1 中加入 300μl 溶液 BG，12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。
注意：这一步骤对于清除内切酶是必不可少的，以防止污染。
9.向吸附柱 CG1中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。
10.重复操作步骤 9。
11.将吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。
12.将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液 TB，室温放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。
注意：洗脱液体积不应少于 50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。
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