RT-PCR Mix for qPCR（预混型逆转录试剂盒）

货号：R1031   规格：100次（20 µl反应体系）

 

产品说明

RT-PCR Mix for qPCR是预混型逆转录反应试剂盒，操作简便，可快速高效完成逆转录反应。其中Enzyme Mix含有高效逆转录酶和热敏型DNase，一步完成基因组DNA的清除以及RNA的逆转录反应，RT Buffer包含逆转录反应所需的其他组分，无需分步多次加样，降低了样品污染的风险。同时，本试剂盒配备了Control Mix，用于阴性对照反应，检验RNA模板中是否有基因组DNA残留。本试剂盒的逆转录产物对染料法和探针法荧光定量PCR反应均有很好的兼容性，可进行精准的基因表达分析。

 

产品组分

组分	R1031（100次）
Enzyme   Mix	100   μl
5X   RT Buffer	400 μl
Control   Mix	20   μl
RNase-free   ddH2O	1   ml × 2

 

保存条件

各组分均-20℃保存，并避免反复冻融。

 

适用范围

第一链cDNA 合成

 

注意事项

l 本品含有热敏型DNase，请于冰上使用本品各组分。

l 为保证成分均匀，请将Enzyme Mix、5X RT Buffer及Control Mix分别瞬时离心、吹打混匀后再吸取使用。

l 在操作过程中，注意防止引入RNase导致RNA降解。RNA最好保存于-70℃，避免反复冻融。

l cDNA产物应置于-20℃或以下保存，避免反复冻融。

 

操作步骤

1. 配制反应体系

按以下体系，在冰浴的无菌无酶离心管中配制反应混合液：

组分	用量
5X   RT Buffer	4 μl
Enzyme   Mix	1 μl
RNA	1pg-1µg
RNase-free   ddH2O	补足至20 μl

 

阴性对照反应（可选）

即不加逆转录酶的反应，产物用于在qPCR中作为阴性对照，检验模板RNA中是否有基因组DNA残留

按以下体系，在冰浴的无菌无酶离心管中配制反应混合液：

组分	用量
5X   RT Buffer	4 μl
Control   Mix	1 μl
RNA	1pg-1µg
RNase-free   ddH2O	补足至20 μl

 

2. 进行逆转录反应

将上述混合液吹打混匀，瞬时离心收集至管底。按以下程序，在PCR仪中进行反应：

温度	时间
50℃	15   min
85℃	5   sec

 

3. qPCR反应及cDNA保存

cDNA产物可稀释后立即进行染料法或探针法qPCR反应。若使用未稀释的cDNA原液，则体积不能超过反应体系的1/10，以避免抑制反应效率。长期保存cDNA产物应于-20℃或以下环境中，并避免反复冻融。