D5025

脱氧核糖核酸酶 I 来源于牛胰腺

Type IV, lyophilized powder, ≥2,000Kunitz units/mg protein

别名:

DNase I, 脱氧核糖核酸 5′-寡核苷酸-水解酶

属性

生物来源

bovine pancreas

质量水平

300

类型

Type IV

形式

lyophilized powder

specific activity

≥2,000Kunitz units/mg protein

分子量

~31kDa

纯化方式

chromatography

组成

Protein, ≥80%

溶解性

0.15 M NaCl: soluble 5.0mg/mL, clear, colorless

application(s)

diagnostic assay manufacturing
diagnostic assay manufacturing

异质活性

Chymotrypsin ≤0.5%
Protease ≤0.05%
RNase ≤0.02%

运输

wet ice

储存温度

20°C

说明

应用

DNAse I可用于切开DNA，作为将标记碱基插入DNA的第一步。来自sigma的该酶已用于处理大鼠的脑组织。该研究表明星形胶质细胞的轴突生长不受少突胶质细胞抑制。[1]在另一项研究中，大肠杆菌的解冻固定样本被来自Sigma的DNAseI以及其他酶进行消化。消化是在进行通透化处理和核酸染色前完成的。[2]

来自牛胰腺的脱氧核糖核酸酶I已用于研究枯草芽孢杆菌中核酸酶的二维酶谱分析。来自牛胰腺的脱氧核糖核酸酶I还用于研究小沟和大沟结合药物和嵌入剂对小沟结合蛋白RecA和脱氧核糖核酸酶I的DNA结合的影响。

用于从蛋白质样品中除去 DNA。

生化/生理作用

DNase I是一种内切核酸酶，可作用于与嘧啶相邻的磷酸二酯键以产生具有末端5′-磷酸的聚核苷酸。当Mg2+存在时，DNAse I可独立切割DNA的每条链且切割位点是随机的。当Mn2+存在时，两条DNA链都几乎是在同样的位置被切割。[3]最适pH在7-8之间。二价阳离子如Mn2+, Ca2+, Co2+以及Zn2+都是酶的激活剂。[4]5 mM浓度的Ca2+可稳定酶免收蛋白水解酶的消化。来自牛胰腺的DNAse I由四种色谱可区分的组分A，B，C和D组成，它们的摩尔比为4:1:1。仅有少量的D被发现。[5]2-巯基乙醇、螯合剂、十二烷基硫酸钠（SDS）[6]和肌动蛋白[7]都已知可抑制酶的活性。

单位定义

一Kunitz单位的酶在以I型或III型DNA作为底物时，在 pH 5.0，37°C的条件下在每mL中每分钟可引起0.001的A260。

外形

含氯化钙的冻干粉

制备说明

溶液0.15 M NaCl的10 mg/mL DNAse I溶液分装保存在20 °C一周后可能会丢失<10%的活性。同样的溶液保存在2-8 °C则可能丢失约20%的活性。当在pH 5和7之间时，它可在60 °C维持活性最长达五小时，并在68 °C <10分钟内丢失活性。它在乙酸缓冲液（pH 5.0）和tris缓冲液((pH 7.2)，1 mg/mL浓度)中以6%/小时的速率丢失活性。 分析说明 蛋白由双缩脲法测定。