产品编号
PH385
Human HGF ELISA Kit
96次
3198
的Human HGF ELISA Kit (Human Hepatocyte Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人肝细胞生长因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的HGF的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为112.7pg/ml，与人EGF、G-CSF、GM-CSF、HGF R、M-CSF、PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、TGF-β1、VEGF，小鼠HGF等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor, HGF)，又称散射因子、肝细胞生成素A和乳腺生长因子，是一种多效性糖蛋白，参与调节多种细胞的生长和迁移。HGF分子具有一个N端的PAN/APPLE样区域、4个Kringle区以及一个催化活性丝氨酸蛋白酶样区域。HGF通常以无活性的单链前体肽形式分泌，在组织损伤部位，无活性的HGF能够在丝氨酸蛋白酶的作用下切除相应区域从而得到有活性的HGF。活性HGF是由60kDa的N端α链和30kDa的C端β链通过二硫键相连形成的异质二聚体。在肝脏损伤、急性肾衰竭、心肌衰弱、I型糖尿病和肿瘤等病理条件下，血液中HGF水平会出现明显升高。人HGF与牛、犬、猫、小鼠和大鼠HGF具有91-94%的氨基酸同源性，具有明显的种间交叉反应性。
HGF主要由成纤维细胞、脂肪细胞、平滑肌细胞和内皮细胞表达，但是HGF受体则主要表达在上皮细胞中，这说明HGF能够以旁分泌的形式参与调节基质与上皮细胞间的相互作用。HGF能够诱导包括上皮细胞、肝细胞、软骨细胞、角质细胞和内皮细胞在内的多种类型细胞的增殖和迁移。HGF能够促进肿瘤细胞发生有丝分裂，但在某些情况下却能抑制其增殖。在器官形成、组织修复和血管生成时，HGF能够促进上皮细胞、内皮细胞的形态形成。HGF调节血管生成和促进上皮细胞有丝分裂的能力是其协助实体瘤发展的重要基础。HGF还能作用于胰岛细胞促进其存活、增殖和胰岛素的产生。另外，HGF能够通过诱导树突状细胞耐受、抑制T细胞激活、抑制IL-17表达和炎性细胞浸润来抑制炎症反应。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich?ELISA)检测样品中人HGF的浓度，其原理见图1。人HGF特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人HGF会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人HGF抗体后，生物素化抗人HGF抗体与人HGF结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人HGF浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人HGF浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
产品编号
产品名称
包装
PH385-1
人HGF抗体预包被板
8孔×12条
PH385-2
样品分析缓冲液
5ml
PH385-3
标准品稀释液
10ml
PH385-4
人HGF标准品
2-4瓶
PH385-5
人HGF生物素化抗体
10ml
PH385-6
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml
PH385-7
洗涤液(20X)
30ml
PH385-8
TMB溶液
10ml
PH385-9
终止液
5ml
PH385-10
封板膜(透明)
2张
PH385-11
封板膜(白色)
2张
–
说明书
1份
保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。