产品编号
JJP60
Mouse IL-5 ELISA Kit
96次
2198
的Mouse IL-5 ELISA Kit (Mouse Interleukin-5 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠白细胞介素5酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-5的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为14.8pg/ml，与小鼠GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-1Rα、 IL-2、IL-3、IL-4，人IL-5等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
白细胞介素5 (Interleukin 5, IL-5)，又称T细胞替换因子、B细胞生长因子II、嗜酸性粒细胞分化因子或嗜酸性粒细胞集落刺激因子，是一种主要由T细胞产生的多效性细胞因子。IL-5能够促进小鼠B细胞增殖和分化，并促进IgM、IgG1、IgA和IgE分泌。IL-5对成熟的嗜酸性粒细胞具有趋化作用，并且能够增强嗜酸性粒细胞的存活能力及功能。另外，IL-5还能与多种集落刺激因子协同作用，增强嗜酸性粒细胞祖细胞的产生和嗜酸性粒细胞扩增。由于IL-5对嗜酸性粒细胞的多种作用效果，IL-5对哮喘和其他嗜酸性粒细胞增多型炎症反应都具有一定影响。
天然的小鼠IL-5是一种分子量在40-45kDa之间的糖蛋白，以二硫键相连的同型二聚体形式存在。小鼠IL-5的cDNA编码产生133个氨基酸的前体蛋白，其中包括一个疏水信号肽和113个氨基酸的成熟IL-5肽段。成熟的人IL-5与小鼠IL-5具有70%的氨基酸同源性，小鼠IL-5和人IL-5对人源细胞系具有等同的生物活性。
小鼠IL-5的受体是由α亚基和β亚基组成的异质二聚体。两种亚基都是I型跨膜蛋白，属于细胞因子受体亚族。α亚基能够与IL-5特异性结合，β亚基又称AIC2B，即βc亚基，同时也是IL-3、IL-5和GM-CSF高亲和受体复合物的组成部分。β亚基并不能直接与IL-5结合，而是要与α亚基一起形成IL-5的高亲和力受体。除了膜表面的α亚基外，还存在一种游离的IL-5 Rα亚基，纯化后的游离IL-5 Rα亚基在功能上具体表现为IL-5的拮抗剂。小鼠IL-5 Rα亚基仅在嗜酸性粒细胞、B细胞和肥大细胞表面表达，而βc亚基则在多种造血细胞系中都有表达。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠IL-5的浓度，其原理见图1。小鼠IL-5特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠IL-5会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠IL-5抗体后，生物素化抗小鼠IL-5抗体与小鼠IL-5结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠IL-5浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中小鼠IL-5浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
产品编号
产品名称
包装
JJP60-1
小鼠IL-5抗体预包被板
8孔×12条
JJP60-2
样品分析缓冲液
5ml
JJP60-3
标准品稀释液
10ml
JJP60-4
小鼠IL-5标准品
2-4瓶
JJP60-5
小鼠IL-5生物素化抗体
10ml
JJP60-6
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml
JJP60-7
洗涤液(20X)
30ml
JJP60-8
TMB溶液
10ml
JJP60-9
终止液
5ml
JJP60-10
封板膜(透明)
2张
JJP60-11
封板膜(白色)
2张
–
说明书
1份
保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时测试时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。