产品编号

JJP62
Mouse TIM-1/KIM-1/HAVCR ELISA Kit
96次

2924

的Mouse TIM-1/KIM-1/HAVCR ELISA Kit (Mouse T Cell Immunoglobulin and Mucin Domain-1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠T细胞免疫球蛋白酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的KIM-1的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为28.6pg/ml，与小鼠TIM-3、TIM-4和人的TIM-1、TIM-3、TIM-4等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
T细胞免疫球蛋白(T cell immunoglobulin and mucin domain-1, TIM-1)，又称肾脏损伤分子(Kidney injury molecule 1, KIM-1)或甲肝病毒细胞受体(Hepatitis A virus cellular receptor 1, HAVcr1)，其分子量大小约为70-80kDa，属于TIM家族成员，主要参与调控固有免疫和获得性免疫应答。TIM-1属于I型跨膜糖蛋白，结构中包括一个N端免疫球蛋白样区域、一个具有O连接和N连接糖基化的粘蛋白区域、一个跨膜片段和一个胞质内信号域。由于基因多态性或选择性剪切，TIM-1存在多种粘蛋白区域缺失的变体[1-2]。小鼠TIM-1与人和大鼠TIM-1分别有41%和82%的同源性。
在体内，TIM-1在脾脏B细胞上有所表达，并且是识别IL-10+调节性B细胞的标志物之一。TIM-1同时也在CD4+ T细胞、肥大细胞、树突状细胞、肾上皮细胞和多种粘膜上皮细胞中表达。在树突状细胞成熟或肾脏受损后，活化的Th2细胞和肾小管上皮细胞分别会出现TIM-1表达的上调。在基质金属蛋白酶的作用下会得到游离形式的TIM-1，当肾脏发生病变时尿液中的TIM-1水平会显著升高，因此TIM-1可以作为肾损伤的标志物之一[3]。
TIM-1作为受体能够与多种配体结合，例如磷酯酰丝氨酸、白血球单一免疫球蛋白样受体5 (LMIR5/CJP0700b)、TIM-1、TIM-4和多种包膜病毒糖蛋白。TIM-1与磷酯酰丝氨酸结合从而对凋亡细胞的吞噬过程进行调控。LMIR5与游离型TIM-1或膜表面的TIM-1相互作用会诱导LIMR5介导的多种骨髓来源细胞的激活，包括巨噬细胞/单核细胞、肥大细胞、中性粒细胞和树突状细胞。配体诱导的TIM-1信号传递能够刺激T细胞的活化，增加Th2型细胞因子的产生[4]。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠TIM-1的浓度，其原理见图1。小鼠TIM-1特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠TIM-1会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠TIM-1抗体后，生物素化抗小鼠TIM-1抗体与小鼠TIM-1结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠TIM-1浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号
产品名称
包装

JJP62-1
小鼠TIM-1/KIM-1/HAVCR抗体预包被板
8孔×12条

JJP62-2
样品分析缓冲液
5ml

JJP62-3
标准品稀释液
10ml

JJP62-4
小鼠TIM-1/KIM-1/HAVCR标准品
2-4瓶

JJP62-5
小鼠TIM-1/KIM-1/HAVCR生物素化抗体
10ml

JJP62-6
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml

JJP62-7
洗涤液(20X)
30ml

JJP62-8
TMB溶液
10ml

JJP62-9
终止液
5ml

JJP62-10
封板膜(透明)
2张

JJP62-11
封板膜(白色)
2张

—
说明书
1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。