产品编号
JJJP8
Mouse/Rat TGF-β1 ELISA Kit
96次
2798
的Mouse/Rat TGF-β1 ELISA Kit (Mouse/Rat Transforming Growth Factor-β1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠/大鼠转化生长因子β1酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠或大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的TGF-β1的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为24.5pg/ml，与小鼠TGF-β2、TGF-β3和大鼠TGF-β2、TGF-β3等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。由于成熟的大鼠TGF-β1与小鼠TGF-β1具有100%的氨基酸同源性，因此两种蛋白均能用本试剂盒进行检测。
转化生长因子(Transforming Growth Factor, TGF)是一种多效性细胞因子，主要有TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3三种类型，其具有调节细胞外基质产生、伤口愈合、免疫应答、细胞增殖和分化多种功能。TGF-β家族还包括骨形成蛋白(Bone?Morphogenetic?Protein,?BMP)、生长分化因子(Growth Differentiation Factors, GDFs)和神经元营养因子等其他蛋白因子，该家族成员在结构上均能够形成多个链内二硫键。
小鼠及大鼠TGF-β1的cDNA编码产生长度为390个氨基酸的前体肽，其中包括29个氨基酸的信号肽和361个氨基酸的前体蛋白。在弗林蛋白酶的作用下，前体蛋白形成249个氨基酸的相关肽(Latency-associated Peptide, LAP)和112个氨基酸的成熟TGF-β1，二者都以同源二聚体的形式存在。经过酶切作用并被分泌出来后，这两个二聚体通过非共价键连接形成了小的无活性复合物。在多细胞中，小的无活性复合物通过LAP与前体TGF-β结合蛋白(Latent TGF-β Binding Protein, LTBP)结合，形成大的无活性复合物，但这两种复合物都无法与TGF-β受体结合，发挥生物学活性，复合物的激活对TGF-β在体内发挥作用十分重要。成熟的大鼠TGF-β1与小鼠TGF-β1具有100%的氨基酸同源性，与猪、人及犬TGF-β1也具有99%的氨基酸同源性。
TGF-β1的高亲和受体是由TGF-β RI和TGF-β RII组成的受体复合物，TGF-β RI和TGF-β RII都属于丝氨酸/苏氨酸激酶受体家族。TGF-β RII与TGF-β结合后，就能够激活并磷酸化TGF-β RI。活化的TGF-β RI又能激活Smad蛋白，从而调控转录过程。TGF-β RI又称为活化素受体样激酶(Activin Recptor-like Kinase, ALK-5)，几乎表达于所有细胞表面，其他两种I型受体，ALK-1和ALK-2也能够与TGF-βRII搭档组成TGF-β信号传递受体复合物参与TGF-β信号传递。除了TGF-β RI和TGF-β RII，还有第三种TGF-β1受体，TGF-βRIII (β蛋白聚糖或内皮糖蛋白)同样能够调控TGF-β功能。TGF-β首先与TβRII结合，然后募集并磷酸化TβRI，活化的受体随后磷酸化受体激活型Smads蛋白(R-Smads)，磷酸化后的R-Smads再与辅助型Smads (Co-Smads)结合，形成异源寡聚体复合物，随后进入细胞核内，调节目标基因。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich?ELISA)检测样品中小鼠/大鼠TGF-β1的浓度，其原理见图1。小鼠/大鼠TGF-β1特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠/大鼠TGF-β1会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠/大鼠TGF-β1抗体后，生物素化抗小鼠/大鼠TGF-β1抗体与小鼠/大鼠TGF-β1结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠/大鼠TGF-β1浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中小鼠/大鼠TGF-β1浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
产品编号
产品名称
包装
JJJP8-1
小鼠/大鼠TGF-β1抗体预包被板
8孔×12条
JJJP8-2
标准品稀释液(5X)
10ml
JJJP8-3
小鼠/大鼠TGF-β1标准品
2-4瓶
JJJP8-4
小鼠/大鼠TGF-β1生物素化抗体
10ml
JJJP8-5
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml
JJJP8-6
洗涤液(20X)
30ml
JJJP8-7
TMB溶液
10ml
JJJP8-8
1N HCl
3ml
JJJP8-9
1.2N NaOH
3ml
JJJP8-10
终止液
5ml
JJJP8-11
封板膜(透明)
2张
JJJP8-12
封板膜(白色)
2张
–
说明书
1份
保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
同种试剂盒不同批号的试剂盒组分不能混用，每批次试剂盒均经过独立测试。不同试剂盒相同名称的组分严禁混用，多个试剂盒同时检测时，注意避免混淆相同名称不同试剂盒的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。