产品编号
JJP85
Rat TIMP-1 ELISA Kit
96次
3398
的Rat TIMP-1 ELISA Kit (Rat Tissue Inhibitors of Metalloproteinases 1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠金属蛋白酶组织抑制剂1酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的TIMP-1的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为24pg/ml，与人TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4, 小鼠TIMP-1等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases, MMPs)是一种具有锌指结构的肽链内切酶，能够催化细胞外基质蛋白发生降解，从而调控发育、组织重构、伤口愈合和肿瘤转移等过程。MMPs以酶原形式分泌，酶原经过蛋白水解后变成有活性的MMPs。金属蛋白酶组织抑制剂(Tissue Inhibitors of Metalloproteinases, TIMP)通过与MMPs形成1:1的复合物抑制MMPs活性。TIMPs与MMPs以非共价键相连，能够阻止MMP与底物连接。TIMP-1属于诱导型蛋白而TIMP-2属于组成型蛋白，二者都属于游离蛋白且分布广泛；TIMP-3主要分布在细胞外基质，TIMP-4则只存在于心肌组织。
TIMP-1是一种氨基酸长度为184的糖基化蛋白，但糖基化并非维持其活性所必须。TIMP-1具有12个半胱氨酸残基，参与形成结构中的二硫键，分子N端具有与MMP底物结合位点相结合的基团，C端则能够与MMP外部结合，增强整体的亲和力。TIMP-1与无活性的pro-MMP-9具有很强的结合能力，在与pro-MMP-9形成复合物后，TIMP-1凭借N端的结合位点依旧保持着抑制其他活化MMP的能力。
许多细胞和组织都能够合成TIMP-1。TIMP-1基因的转录受到IL-1、IL-6、OSM、LIF和TNF-α等许多细胞因子和佛波酯的调控。TIMP-1的许多生理功能都与MMPs密切相关，MMP/TIMP-1浓度失衡会导致关节炎、肿瘤生长和转移等病理改变。另一方面，TIMP-1也具有一些独立的功能，例如TIMP-1能够抑制B细胞的凋亡，说明TIMP-1除了抑制MMPs外，还能够与一些特定细胞结合并进入细胞核内，促进特定细胞的存活和生长。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中大鼠TIMP-1的浓度，其原理见图1。大鼠TIMP-1特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的大鼠TIMP-1会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗大鼠TIMP-1抗体后，生物素化抗大鼠TIMP-1抗体与大鼠TIMP-1结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。大鼠TIMP-1浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中大鼠TIMP-1浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
产品编号
产品名称
包装
JJP85-1
大鼠TIMP-1抗体预包被板
8孔×12条
JJP85-2
样品分析缓冲液
5ml
JJP85-3
标准品稀释液(5X)
10ml
JJP85-4
大鼠TIMP-1标准品
2-4瓶
JJP85-5
大鼠TIMP-1生物素化抗体
10ml
JJP85-6
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml
JJP85-7
洗涤液(20X)
30ml
JJP85-8
TMB溶液
10ml
JJP85-9
终止液
5ml
JJP85-10
封板膜(透明)
2张
JJP85-11
封板膜(白色)
2张
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说明书
1份
保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。