产品编号

PV977
Human vWF ELISA Kit
96次

3198

的Human vWF ELISA Kit (Human von Willebrand Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人血管性血友病因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆中VWF的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为216.8pg/ml，与人ADAMTS13、CD42b
、Glycoprotein、Thrombospondin-1等均没有交叉反应。板内、板间变异系数均小于10%。
血管性血友病因子(von?Willebrand?Factor,?vWF)是由血管内皮细胞和巨核细胞产生的一种多聚体糖蛋白。pre-pro-vWF蛋白包含2831个氨基酸，其中包括22个氨基酸的信号肽、741个氨基酸的前导肽和2050个氨基酸的成熟vWF单体。pro-vWF在内质网中通过C端的CK?(cysteine-knot)区域形成二聚体，随后pro-vWF二聚体被运输至高尔基体中，并通过氨基末端所形成的二硫键形成多聚体结构，前导肽的切除过程也发生在高尔基体中。成熟的vWF主要存在于血管内皮细胞、巨核细胞和血小板中。细胞分泌出的ulvWF?(unusually-large?vWF)多聚体会迅速与血小板结合，从而造成血栓形成，此类vWF的产生需要一种特殊的蛋白酶ADAMTS13的参与。在血浆中存在的vWF分子量大多在500kDa到几千kDa不等。当机体处于出血状态时，vWF会发生特定的构象改变，暴露出特殊的糖蛋白结合位点，从而促进血小板的聚集，达到止血的效果。除此之外，vWF还能够与凝血因子VIII结合，延长凝血因子半衰期。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich?ELISA)检测样品中人vWF的浓度，其原理见图1。人vWF特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人vWF会与捕获抗体结合。当加入辣根过氧化物酶标记人vWF抗体后，辣根过氧化物酶标记人vWF抗体与人vWF结合，形成夹心的免疫复合物。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人vWF浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人vWF浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号

产品名称

包装

PV977-1

人vWF抗体预包被板

8孔×12条

PV977-2

标准品稀释液(20X)

30ml

PV977-3

人vWF标准品

2-4瓶

PV977-4

辣根过氧化物酶标记人vWF抗体

10ml

PV977-5

洗涤液(20X)

30ml

PV977-6

TMB溶液

10ml

PV977-7

终止液

5ml

PV977-8

封板膜(透明)

2张

PV977-9

封板膜(白色)

2张

–

说明书

1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组份严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。