产品编号
PJJP010094
Human C5a ELISA Kit
96次
3198
的Human C5aELISA Kit(Human C5aEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人补体成分C5a酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的C5a的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为17.5pg/ml，与人C3a没有交叉反应，与C3有25%的交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。
补体系统(complement system)是由30多种血浆蛋白和膜蛋白组成，广泛存在于血液、组织液和细胞表面，是一种具有精密调控机制的蛋白反应系统。补体的主要生理功能是促进吞噬细胞的吞噬能力和溶解靶细胞，因此是机体免疫防御机制的重要组成部分。C5a是由蛋白酶C5转化酶将补体组分C5切割成C5a和C5b片段而释放的蛋白质片段，相对分子质量约为11kDa。人的C5a与小鼠和大鼠的C5a分别有60%和54%的同源性。C5起源于肝细胞，但其也可以在巨噬细胞中合成。在巨噬细胞中合成时，可能导致C5a的局部增加。
C5a是一种趋化剂和过敏毒素，是补体裂解片段中显示过敏毒素作用最强的介质，是先天免疫必不可少的一部分，也与适应性免疫有关，其含量的增加与许多炎症性疾病相关。C5a可不依赖肥大细胞释放组胺，而是通过直接作用于血管内皮细胞而增加血管的通透性，刺激平滑肌收缩。高浓度的C5a是中性粒细胞、嗜酸粒细胞和单核细胞的趋化剂，可诱导这些细胞顺浓度梯度方向移动。C5a与C5aR(CD88)结合，激活下游G蛋白偶联的通路，引起中性粒细胞趋化性和内皮细胞的活化。C5a也会引起巨噬细胞与中性粒细胞的急剧氧化。此外，C5a对免疫应答有明显的增强作用，可诱导单核细胞分泌IL-1、IL-6、IL-8及TNF-α等细胞因子，促进抗原及同种异体抗原诱导的T细胞增殖及B细胞产生抗体等。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人C5a的浓度，其原理见图1。人C5a特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人C5a会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人C5a抗体后，生物素化抗人C5a抗体与人C5a结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人C5a浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。
图1.双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
产品编号
产品名称
包装
PJJP010094-1
人C5a抗体预包被板
8孔×12条
PJJP010094-2
标准品稀释液(5X)
60ml
PJJP010094-3
人C5a标准品
2-4瓶
PJJP010094-4
人C5a生物素化抗体
10ml
PJJP010094-5
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml
PJJP010094-6
洗涤液(20X)
30ml
PJJP010094-7
TMB溶液
10ml
PJJP010094-8
终止液
5ml
PJJP010094-9
封板膜(透明)
2张
PJJP010094-10
封板膜(白色)
2张
—
说明书
1份
保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。/p>
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。