产品编号
PC215
Mouse Cys-C ELISA Kit
96次
3198
的Mouse Cys-C ELISA Kit (Mouse Cystatin C Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠胱氨酸蛋白酶抑制剂C酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的Cys-C的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为12.8pg/ml，与小鼠E-Selectin、ICAM-1
、L-Selectin、P-Selectin及人Cys-C等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
半胱氨酸蛋白酶抑制剂C (Cystatin C, Cys-C)，又称胱抑素C，是一种由CJJP30基因编码产生的分泌型半胱氨酸蛋白酶抑制剂，属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族。其含有120个氨基酸残基，分子量在13kDa左右，以非糖基化的形式存在，在大鼠体内存在有糖基化的Cys-C。成熟的小鼠和大鼠Cys-C之间具有88%的氨基酸同源性，与人Cys-C具有72%的氨基酸同源性。Cys-C容易在内切蛋白酶的作用下得到N端缩短的Cys-C形式。木瓜蛋白酶家族中的半胱氨酸蛋白酶例如组织蛋白酶B、H、K、L及S都会受到Cys-C的影响。
多种组织均能产生Cys-C，在血浆、尿液及脑脊液等多种体液样本中都可以检测到Cys-C。Cys-C能够轻松被肾小球滤过，随后被近端小管表皮细胞通过巨蛋白介导的内吞作用所吸收代谢，因而无法重新回到血液中。因此血清中Cys-C的浓度与肾小球滤过率密切相关。其在血清或血浆中的浓度被认为是评估药物肾毒性的指标之一，并且与肌酸酐相比，Cys-C受性别、年龄、体重及肝硬化影响较小。但是在慢性炎症期间Cys-C的浓度会有所增加，这一部分是由于IL-6增加Cys-C产生有关。相反，一些抗炎性细胞因子如IL-10、IFN-β和IFN-γ则会减少Cys-C的表达，降低其浓度。
Cys-C通过调节半胱氨酸蛋白酶的活性影响部分疾病发展。在人体内，肾功能正常状态下Cys-C浓度过高通常与冠状动脉和心血管疾病相关。游离的Cys-C对肿瘤的转移具有一定影响，异常的Cys-C水平过低，会导致组织蛋白酶B介导的细胞外基质降解增加，从而促进肿瘤转移，Cys-C浓度升高时则会表现出对TGF-β的拮抗作用，减慢肿瘤的侵袭和生长。在小鼠阿尔兹海默病模型中，Cys-C还能够抑制β-淀粉蛋白沉积，保护小鼠神经元细胞免受损害。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich?ELISA)检测样品中小鼠Cys-C的浓度，其原理见图1。小鼠Cys-C特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠Cys-C会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠Cys-C抗体后，生物素化抗小鼠Cys-C抗体与小鼠Cys-C结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠Cys-C浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中小鼠Cys-C浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
产品编号
产品名称
包装
PC215-1
小鼠Cys-C抗体预包被板
8孔×12条
PC215-2
标准品稀释液(5X)
10ml
PC215-3
小鼠Cys-C标准品
2-4瓶
PC215-4
小鼠Cys-C生物素化抗体
10ml
PC215-5
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml
PC215-6
洗涤液(20X)
30ml
PC215-7
TMB溶液
10ml
PC215-8
终止液
5ml
PC215-9
封板膜(透明)
2张
PC215-10
封板膜(白色)
2张
–
说明书
1份
保存条件：
标准品4oC保存，1-2周内有效，-20oC保存6个月内有效；试剂盒其它组份4oC保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组份严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。