产品编号
PE230
Human EPO ELISA Kit
96次
3518
的Human EPO ELISA Kit (Human Erythropoietin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人促红细胞生成素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的EPO的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为14.4pg/ml，与人IL-1β、IL-1RA、IL-2、IL-3、 IL-4 、IL-5 、IL-6、 IL-8、IL-10、小鼠 EPO等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
促红细胞生成素(Erythropoietin, EPO)是由肾脏产生的一种糖蛋白，参与调节哺乳类动物中红细胞生成。EPO的产生受到氧利用率变化的调节，在缺氧条件下，EPO水平会有所上升，从而导致红细胞数量增加。EPO的过表达与部分病理生理性变化相关。红血球增多症是指体内红细胞数量过多，原发性红血球增多症主要是由于EPO非依赖性的红细胞祖细胞生长，患者血液中EPO浓度基本处于正常水平。然而，继发性红血球增多的发生则与异常升高的EPO水平有关。当居住于高海拔地区或出现慢性阻塞性肺疾病、紫绀型心脏病、睡眠呼吸障碍、血红蛋白病、吸烟和局部性肾组织缺氧时，机体会呈现缺氧状态，此时机体会出现适应性反应，上调EPO的产生。另外，在多种肿瘤患者中也会出现EPO水平增加、红细胞数增多的情况。EPO浓度过低与某些特定类型的贫血症相关，例如肾性贫血和慢性贫血、早产性贫血、甲状腺功能减退性贫血和营养不良导致的贫血。上述许多情况都与IL-1和TNF-α有关，这两种细胞因子能够抑制EPO的活性，从而抑制血红细胞产生。但是有部分形式的贫血属于EPO非依赖性，因此在这些患者中EPO通常仍旧处于较高水平，例如再生障碍性贫血、缺铁性贫血、地中海贫血、巨幼红细胞性贫血和骨髓增生异常综合征等。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人EPO的浓度，其原理见图1。人EPO特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人EPO会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人EPO抗体后，生物素化抗人EPO抗体与人EPO结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人EPO浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人EPO浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
产品编号
产品名称
包装
PE230-1
人EPO抗体预包被板
8孔×12条
PE230-2
样品分析缓冲液
5ml
PE230-3
标准品稀释液
10ml
PE230-4
人EPO标准品
2-4瓶
PE230-5
人EPO生物素化抗体
10ml
PE230-6
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml
PE230-7
洗涤液(20X)
30ml
PE230-8
TMB溶液
10ml
PE230-9
终止液
5ml
PE230-10
封板膜(透明)
2张
PE230-11
封板膜(白色)
2张
–
说明书
1份
保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组份4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组份严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。