Wako热启动 PCR用DNA聚合酶——Hot-Start Gene Taq

本产品是Hot Star PCR用的耐热型DNA聚合酶。进入PCR循环前先经过95℃，5分钟的热处理，对本产品进行酶活性化处理。

在PCR初期需要进行过量酶活抑制的热启动PCR，以抑制引导错误、无效酶失活。根据用途的不同，附有可分开使用的2种10倍浓度的反应缓冲液。

◆特点

●　高特异性和DNA高回收率
●　具有热启动功能，可在室温条件下配制反应液
●　最适用于多路传输PCR
●　极少有宿主源DNA混入，纯度高

◆产品组成

Hot Start Gene Taq	250 units	50 units
dNTP 混合物 (2.5 mmol/L each)	800 μL×１瓶	160 μL×１瓶
10×Gene Taq通用缓冲液 (15 mmol/Ll Mg2+)	1 mL×１瓶	1 mL×１瓶
10×Brilliant Buffer (20 mmol/L Mg2+)	1 mL×１瓶	200 μL×１瓶

◆产品信息

M.W.	68 kDa
活性	2.5 units/μL
单位的定义	1 unit是指以活化小牛胸腺DNA为引物/模板，在74℃下，30分钟内，将10nmol的脱氧核苷酸渗入不溶酸沉淀物，使其酶活化。
形状	20 mmol/l Tris-HCl (pH8.0)、100 mmol/l KCl、0.1 mmol/l EDTA、0.5 % Tween 20、1 mmol/l DTT、50%甘油
纯度	将10 units本酶和1μgλ/HindⅢ digest，在74℃下反应1小时，无法辨别对琼脂糖凝胶电泳样品的影响。

 

◆实验案例

以HeLa DNA（50ng）为模板，对下列三种扩增困难的引物进行Shuttle PCR。

【引物】

・A-1
F：5′-AGTGGGCAGAGCCAGTCACT-3′
R：5′-AGACTGGATGCCCAGCCTAA-3′
・A-2
F：5′-CAGACTCTGGGGCTGCCCAT-3′
R：5′-TCAAACACTGGCTTGGGGTA-3′
・A-3
F：5′-CCTTGGAGCAATGAGCAATG-3′
R：5′-CATCTTTCCAGGCTCCTTCC-3′

【实验方法】

模板DNA	50 ng
引物 (10 μM each)	1 μL
10×反应缓冲液	5 μL
聚合酶	5 μL
dNTP 混合物	0.2 mM
聚合酶	0.25 U
总量	50 μL
PCR条件	95℃, 5 分钟 ↓ (95℃, 30 sce→68℃, 1.5 min)×30 周期 ↓ 68℃, 3 分钟 ↓ 4℃

 

【结果】

在热启动Gene Taq使用Brilliant Buffer，即使低特异性的引物，也可实现高特异性扩增，使目的扩增产物取得高回收量。

◆产品信息

产品编号	产品名称	包装
313-07044	热启动基因Taq酶 Hot-Start Gene Taq	50 units
319-07041		250 units
315-07043		250 units×4