BCA蛋白浓度测定试剂盒,常用生化试剂

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BCA蛋白浓度测定试剂盒品牌：JinPan | 货号：EK-5001-500T

BCA Protein Assay Kit

【保存条件】

 BCA 试剂 A 室温避光保存 1 年 BCA 试剂 B 室温保存 1 年 蛋白标准品-20℃保存 1 年

 【概述】

 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之 一 BCA 法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓 度下限达到 25µg/ml，最小检测蛋白量达到 0.5µg，待测样品体积为 1-20µl。在 50-2000µg/ml 浓度范围内有 较好的线性关系。 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达 5%的 SDS，5%的 Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保 EDTA 低于 10mM，无 EGTA，二硫苏糖醇(DTT) 低于 1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不适用 BCA 法时建议试用本司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。 

【操作方法】

 1.配制 BCA 工作液： 依据样品数量，将试剂 A 和试剂 B 按体积比 50:1 配制适量 BCA 工作液，并充分混匀。 注：配制 BCA 工作液前请将试剂 A 摇晃混匀，观察是否析出结晶，如若析出结晶，可 37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品： 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有 干扰本试剂盒检测的物质，也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。具体如下表：

BCA蛋白浓度测定试剂盒

3.蛋白浓度的检测
a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。
b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl，需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。
c. 各孔加入 195µl BCA 工作液。 37℃放置 30 分钟。
注:也可以室温放置 2 小时，或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应
会因温 度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。
d. 用酶标仪测定 A595，或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在 2小时内测定，2 小时内检测数据无显著变化。
4.数据计算
a.以不同浓度的蛋白标准液为横坐标
b. 以不同浓度的蛋白标准测得 OD 值（多孔则为平均 OD）为纵坐标
c. 建立线性关系，获得公式（如右图中所示(本产品实际检测)，若测得样品 OD=0.6 则 0.6=0.4995x+0.4151，计算得浓度 x=0.37mg/ml）

BCA蛋白浓度测定试剂盒

【注意事项】
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 不同 96 板的吸收值会有不同，得到 OD 有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）。
3. 蛋白标准液（5mg/ml）收到后尽快分装，避免反复冻融。
4. BCA 试剂 A 在低温环境下会析出结晶，可适当 37℃水浴促溶后使用。
5. 请使用 96 孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为 595nm。

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