脂多糖提取试剂盒 Lipopolysaccharide（LPS）Extraction Kit
货号：17141
规格：100次
品牌：intronbio
LPS背景描述：
◆ 脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的主要成分，结构很复杂、热稳定性*（在250℃下干热灭菌2h才*灭活）。受LPS发现的历史原因，如今LPS的概念几乎等同于内毒素（endotoxin）。LPS由多糖链和脂质A组成，不同细菌间的多糖链是高度变化的，决定细菌的血清型；而脂质A主要影响LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的级联反应和机体的毒性病理生理活动，包括释放内毒素引起感染性休克从而导致末梢血管虚脱。临床常通过检测LPS的存在来诊断脑膜炎。
◆ 正是LPS与机体免疫机能的密切关系，生命科学研究常常提取LPS进行相关的研究，如阐明LPS的结构，代谢，免疫学，生理学，毒性，生物合成途径；诱导生长促进因子如白介素的合成与分泌；诱导疾病研究的动物模型如炎症反应，急性肺损伤，
产品描述：
◆ 常用的LPS提取方法仍然是Westphal,O. (1965)使用的热酚–水法（hot phenol-water method），主要优势在于高产量，但是提取步骤繁琐，费时，以及常受蛋白质和核酸的污染，纯度低等缺点也常困扰科研工作者。
◆ iNtRON提供的LPS提取试剂盒是市场上的个商品化的产品，排除传统热酚–水法的缺陷，使得科研工作者能够快速方便的从细菌中提取LPS。
产品优势：
∷ 适用性广，能从所有G–菌中提取LPS（见Fig. 2）；
∷ 操作时间短（包括裂解在内，60min内即可完成）；操作简单方便；
∷ 少量细菌即可获得足够的LPS；LPS产量与细菌培养物成正比，一般使用3~5ml培养物LPS产量高；细菌适合培养体积1~2ml（OD600=0.8-1.2）
∷ LPS产率高，且重复性好（见Fig.1）；
∷ 提取LPS下游应用广，包括直接用于免疫刺激；
操作步骤：
1）室温离心收获细菌细胞，13，000rpm，30sec。
2）加入1ml裂解缓冲液（Lysis Buffer），剧烈涡旋混匀。
3）加入200μl氯方，剧烈涡旋混匀10-20 sec，室温孵育5min。
4）4℃，13,000rpm离心10min，转移400μl上清到新1.5ml离心管中。
5）加入800μl纯化裂解液（Purification Buffer），并混匀。-20℃孵育10min。
6）4℃，13,000rpm离心15min。
7）用1ml 70%EtOH洗涤LPS颗粒，并*干燥。
8）在LPS中加入70μl Tris-HCL（10mM，pH8.0），并超声。
技术数据
LPS提取率
|
应变 |
LPS收率（μg） | 蛋白质污染* |
|---|---|---|
| 鼠伤寒沙门氏菌 | 200 ~ 400 | < 0.2微克 |
| 肠炎链球菌 | 90 ~ 250 | < 0.2微克 |
| S. gallinarum （沙氏菌） | 150 ~ 450 | < 0.2微克 |
| 大肠杆菌（野生型） | 220 ~ 490 | < 0.2微克 |
| 大肠杆菌 （O：055） | 260 ~ 510 | < 0.2微克 |
| 大肠杆菌 （O：111） | 220 ~ 500 | < 0.2微克 |
| 大肠杆菌 （O：1） | 180 ~ 380 | < 0.2微克 |
| 大肠杆菌 （O：2） | 180 ~ 380 |
< 0.2微克 |
5 使用LPS提取试剂盒从OD600的每个G（-）菌株中提取LPS后，使用Purpald测定法对提取的LPS进行定量，结果证实了上述提取效率。另一方面，使用我们的 SMART™ Micro BCA 检测试剂盒观察到蛋白质的存在，并确认污染小于 0.2 μg。
从不同菌株中提取的LPS的条带模式
泳道 1 ： 鼠伤寒沙门氏菌 泳道 2 ： 肠炎
链球菌 泳道 3 ： 大肠杆菌 （O055） 泳道 4 ： 大肠杆菌 （O111） 泳道 5 ： 鼠伤寒沙门氏菌 泳道 6 ： 肠炎
链球菌 泳道 7 ： 鼠伤寒沙门氏菌 泳道 8 ： 大肠杆菌 （野生tyoe） 泳道 9 ： 大肠杆菌 （O111） 泳道 10 ： 大肠杆菌 （O2）
由于从各种类型的革兰氏阴性细菌中提取的LPS的SDS-PAGE后银染色，根据作为多聚体存在的LPS的特征和多聚体的数量，观察到阶梯形式的条带模式。据观察，模式存在差异。
产品检测数据图片：
引文列表：
| 1 | Vaccine Volume 36, Issue 29, 5 July 2018, Pages 4153-4156 |
Immunization with lipopolysaccharide-free outer membrane complexes protects against Acinetobacter baumannii infection | Marina R. Pulido a, Meritxell García-Quintanilla a, Jerónimo Pachón a, b, Michael J. McConnell | Spain |
| 2 | bioRxiv, 2023 | Understanding the Mechanisms of Salmonella Typhimurium resistance to Cannabidiol | Iddrisu Ibrahim, View ORCID ProfileJoseph Atia Ayariga, Junhuan Xu, Daniel A. Abugri, Robertson K. Boakai, Olufemi S. Ajayi | USA |
| 3 | Biosensors 2022, 12, 153. https://doi.org/10.3390/bios12030153 https://www.mdpi.com/journal/biosensors | A Novel Peptide as a Specific and Selective Probe for Klebsiella pneumoniae Detection | Hyun Kim, Ju Hye Jang , Young Jung, Ju Hyun Cho | Korea |
| 4 | Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 5442. https://doi.org/10.3390/ijms23105442 https://www.mdpi.com/journal/ijms | Prunetinoside Inhibits Lipopolysaccharide-Provoked Inflammatory Response via Suppressing NF-κB and Activating the JNK-Mediated Signaling Pathway in RAW264.7 Macrophage Cells | Abuyaseer Abusaliya, Pritam Bhagwan Bhosale, Hun Hwan Kim, Sang Eun Ha, Min Yeong Park, Se Hyo Jeong , Preethi Vetrivel, Joon-Suk Park, Gon Sup Kim | Korea |
| 5 | Journal of Oral Biosciences Available online 2 June 2022 |
Green tea catechins inhibit Porphyromonas gulae LPS-induced inflammatory responses in human gingival epithelial cells | ShoYoshida, HiroakiInaba, RyotaNomura, Kazuhiko Nakano, Michiyo Matsumoto-Nakano | Japan |