柠檬酸—柠檬酸钠粉剂(10mmol/L,pH6.0)品牌:JinPan | 货号:JP-8330-1p
Sodium Citrate Buffer(0.01mol/L, pH6.0, powder),1L/pack
【保存条件】
室温保存,有效期 2 年
【概述】
柠檬酸-柠檬酸钠抗原修复液是一种最常用的抗原修复液,可以用于多聚甲醛、甲醛或 其它醛类试剂固定后的石蜡切片、冰冻切 片的抗原修复。
细胞或组织多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后,会导致蛋白之间的交联,遮蔽了样 品的抗原位点,导致免疫染色时 染色信号减弱,甚至出现一些假阳性染色结果,这就需要 对组织进行抗原修复。
通常石蜡切片都需进行抗原修复处理,而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复 会大大改善石蜡切片的免疫染色 效果,对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显 著改善,特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时,可以考虑尝试进 行抗原修复。从原理上 来看,无论冰冻切片还是细胞爬片等,只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定的样品, 进行抗 原修复都会有效去除蛋白之间的交联,充分暴露抗原表位,从而大大改善免疫染色 效果。
本产品特别适用于石蜡切片,也可以用于冰冻切片。
【使用建议】
实验前准备:
本产品为干粉,使用时用蒸馏水或去离子水溶解,定容至 1L,如需必要,可使用盐酸调 pH 值至 6.0。
抗原修复:
1. 高压蒸汽法
a. 抗原修复:压力锅中加入足以淹没切片的抗原修复液,加热至沸腾。
b. 将脱蜡至水的切片置染色架上,放入锅中,盖好锅盖,扣上压力阀加压,设置保压 4 min。
c. 压力下降后打开锅盖,放置室温冷却,待溶液冷却至室温后取出切片。
d. PBS 或 TBS 洗涤 3 次,每次 5 min,随后即可进行后续的免疫染色步骤。
2. 蒸煮锅法
a. 将置于染色架上的切片放于抗原修复液中,95~100°C 加热 10~20 min。
b. 冷却至室温后取出,PBS 或 TBS 洗涤 3 次,每次 5 min,随后即可进行后续的免疫染色 步骤。
3. 微波法
a. 向微波炉专用容器中加入抗原修复液,加热至沸腾。
b. 将脱蜡至水的切片置染色架上,放于容器中,煮沸 10~20 min。
c. 冷却至室温后取出,PBS 或 TBS 洗涤 3 次,每次 5 min,随后即可进行后续的免疫染色 步骤。
4. 对于其他切片 对于其它样品的抗原修复,可以参考石蜡切片的步骤进行。
【注意事项】
1. 抗原修复的时间为建议时间,请根据不同的样品、抗体和抗原自行摸索。
2. 抗原修复后,待溶液冷却至室温后再取出切片,使抗原表位在经历高温后复原。
3. 抗原修复液的加入量要足以淹没切片几厘米,防止在煮沸过程中切片变干。
4. 抗原修复过程需使用耐热染色架进行操作。
5. 试剂有潮解性,若有潮解请放心使用。
6. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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