标签归档：裂解

SDS细胞裂解液,常用生化试剂

发表于由

SDS细胞裂解液品牌：JinPan | 货号：JP-8151-100ml

SDS lysis buffer

【保存条件】 

4℃保存，有效期 1 年。 

【概述】 

SDS 裂解液是一种较为强烈的细胞组织裂解液，可用于动物、植物的细胞或组织样品， 也可以用于真菌或细菌样品。SDS 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE、 Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。 

【使用建议】 

1.对于培养细胞样品： 

a.取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 

b.对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋 白没有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。 植物细胞宜在冰上裂解 2-10min。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分钟。 

对于悬浮细胞：

离心收集细胞，轻轻涡旋或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照 6 孔板每 孔细胞加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分钟。 

对于细菌或酵母：

对于 1ml 菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用 PBS 洗涤一 次，充分去除液体后，轻轻涡旋或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入 100-200μl 裂 解液，轻轻涡旋或者弹击管底以混匀，冰上裂解 2-10min。如果希望获得更好的裂解效果， 细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液进行裂解。 

裂解液用量说明：

通常6孔板每孔细胞或者1ml的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200μl 或 250μl。每 100 万动物细胞用 100μl 本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为 2-4mg/ml，不同细胞所不同。 c.充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。

2.对于组织样品： 

a.把组织剪切成细小的碎片。 

b.融解 SDS 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的 最终浓度为 1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 

c.按照每 20mg 组织加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添 加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 

d.用玻璃匀浆器匀浆，或使用组织研磨仪研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液 氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂 解 10 分钟。 

e.充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。每 20mg 冻存的小鼠肝脏组织用 200μl 本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓 度约为 15-25mg/ml，不同状态的不同组织有所不同。 

f.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品 裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀 浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。

【注意事项】 

1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

2. 本产品长时间低温存放可能会出现沉淀，可在 37ºC 水浴约 10 分钟以充分溶解沉淀。沉 淀完全溶解混匀后即可正常使用。 

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 

4. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。

RIPA裂解液 (低强度),常用生化试剂

发表于由

RIPA裂解液 (低强度)品牌：JinPan | 货号：JP-8150-100ml

RIPA Lysis Buffer weak

【保存条件】 

-20℃保存，有效期 1 年，频繁使用可放置 4℃保存。 

【概述】 

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得 到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 和 ELISA 等。 

RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为高强度、中强度、低强度三类。请根据不同需求选择不同强度 RIPA 裂解液。 

【使用建议】 

如发现 RIPA 有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。根据使用量，取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。 

1. 样品前处理： 

a) 对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每 孔细胞量加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分 接触。 

b) 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有 明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。 

c) 对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250μl 裂解液的 比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 

2. 后处理：

将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓 度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。 

【注意事项】 

1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

2. 本产品长时间低温存放可能会出现沉淀，可在 37ºC 水浴约 10 分钟以充分溶解沉淀。沉 淀完全溶解后即可正常使用。 

3. 为保证最佳的使用效果，请尽量避免过多的反复冻融，可分装后使用。 

4. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 

5. RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下， 可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。 

6. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。

RIPA裂解液 (中强度),常用生化试剂

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RIPA裂解液 (中强度)品牌：JinPan | 货号：JP-8149-100ml

RIPA Lysis Buffer normal

【保存条件】 

-20℃保存，有效期 1 年，频繁使用可放置 4℃保存。 

【概述】 

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得 到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 和 ELISA 等。 

RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多种，根据其 裂解液的强度大致可以分为高强度、中强度、低强度三类。请根据不同需求选择不同强度 RIPA 裂解液。 

【使用建议】 

如发现 RIPA 有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。根据使用量，取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。 

1. 样品前处理： 

a) 对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每 孔细胞量加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分 接触。 

b) 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有 明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。 

c) 对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250μl 裂解液的 比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白 样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 

2. 后处理：将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓 度测定、SDS-PAGE、Western blotting 

【注意事项】 

1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

2. 本产品长时间低温存放可能会出现沉淀，可在 37ºC 水浴约 10 分钟以充分溶解沉淀。沉 淀完全溶解后即可正常使用。 

3. 为保证最佳的使用效果，请尽量避免过多的反复冻融，可分装后使用。 

4. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 

5. RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物 为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下， 可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可 以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些 常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到 这些转录因子。 

6. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途

本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。

ChIP-Seq 核裂解液,常用生化试剂

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ChIP-Seq 核裂解液品牌：JinPan | 货号：JP-8145-100ml

ChIP-Seq Nuclear Lysis buffer

【保存条件】 

-20 ℃保存，有效期 12 个月 

【概述】 

本品适用于小片段（5-500bp）单链 DNA 的杂交反应，获得更优质的杂交双链 DNA 片段，如 shRNA、gRNA 载体等构建。 

【操作方法】 

1. 收获细胞核后，将细胞核重悬于 3-5 倍体积的冰冷的 ChIP-Seq 核裂解缓冲液中（5 倍体积取决于细胞核 提取过程中细胞裂解液用量，如细胞裂解液用量为 100µl 则加入 500µl ChIP-Seq 核裂解液） 

2. 将试管在冰上孵育 20 分钟。 

3．从每个样品中取 5 µL 等分试样，并用 15 µL TE 稀释以用于分析凝胶确认。（注：将剩余保存在冰上或 冻-20 ℃，直到需要为止。该样品用于确认染色质在分离前是完整的。） 

4. 将试管放入设定为 2°C 的超声浴中, 调节水位，使管子刚好接触杯垫的表面。。 如用 Misonix 431A 对每个试管进行 300 µl 的超声处理非常稳定，因此我们建议将较大的样品分成多个试管进行超声处理。将至少两个和多达 8 个试 管放入超声仪的试管支架中。 

5. 用 10 秒的脉冲和 10 秒的静止时间以 20 的振幅对样品进行超声处理，总超声时间为 30 分钟。 

6. 从超声仪中取出样品，并保存在冰上。 

7. 取 5 µl 样品，并用 15 µl TE 稀释以用于分析凝胶。 

8. 在 37°C 下，用 10 µg RNase A 样品 15 分钟。 

9. 在 65°C 下用 20 µg 蛋白酶 K 样品 30 分钟。 

10. 在 95°C 下反向交联 5 分钟，使样品缓慢冷却至室温。 需要执行这些步骤以确保 DNA 在琼脂糖凝胶上的正确迁移。否则，将发生比预期高得多的分子量的涂污或迁移。 

11. 将加样染料添加到每个样品中，并在 TAE 运行缓冲液中的 1％琼脂糖凝胶上分离样品。 

12. 凝胶成像仪下观察琼脂糖凝胶上的 DNA 样品。 剪切染色质的大小应在 200 至 500 bp 之间。 

13. 若步骤 12 完成后鉴定可行，将步骤 6 中其余样品在 4°C 下以 16,000 g 的速度离心 10 分钟，以去除不 溶物。 

14. 将可溶的剪切染色质转移到新鲜的 1.5ml 离心管中。 染色质可以在液氮中冷冻，并在-80°C 下保存直至需要。 

15．按上述方法用 RNase A，蛋白酶 K 和交联逆转处理等分试样（步骤 8-10）。 

16．使用 QIAquick PCR 纯化试剂盒纯化染色质，并使用 NanoDrop 等测量 DNA 浓度。 

【注意事项】 

1. 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用，以免污染。 

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。

IP/Co-IP细胞裂解液,常用生化试剂

发表于由

IP/Co-IP细胞裂解液品牌：JinPan | 货号：JP-8142-100ml

IP/Co-IP Cell Lysis Buffer

【保存条件】 

4ºC 保存 

【操作方法】 

裂解贴壁细胞的方法（裂解前可加入相应蛋白酶/磷酸酶抑制剂）： 

1. 小心地从细胞中去除培养基。 用冰冷的 PBS 清洗一次。 

2. 将冰冷 IP 细胞裂解缓冲液添加到细胞板中（6 孔板中每孔加入 200-400μl），并在冰上孵 育 5 分钟，中途不间断混匀。 

3. 将裂解液转移至微量离心管中，以约 13,000×g 的速度离心 10 分钟，以在 4°C 下沉淀细 胞碎片。 

4. 将上清液转移到新的试管中，以测定蛋白浓度并进行进一步分析。 

裂解悬浮细胞的方法（裂解前可加入相应蛋白酶/磷酸酶抑制剂）： 

1. 将细胞悬液以 1,000×g 离心 5 分钟以沉淀细胞，丢弃上清液。 

2. 用冰冷的 PBS 洗涤细胞一次，以 1,000×g 离心 5 分钟以沉淀细胞。 

3. 将冰冷的 IP 细胞裂解缓冲液添加到细胞沉淀中。每 50 mg 湿细胞沉淀（10：1 v / w）使 用 500μl 裂解缓冲液。 

4. 在冰上孵育裂解物 5 分钟。通过在 4°C 下以〜13,000×g 离心 10 分钟去除细胞碎片。 

5. 将上清液转移到新的试管中，以测定蛋白浓度并进行进一步分析。 

【注意事项】 

1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。

RIPA裂解液 (高强度),常用生化试剂

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RIPA裂解液 (高强度)品牌：JinPan | 货号：JP-8148-100ml

RIPA裂解液（高强度）使用说明书

【包装规格】

产品编号

产品名称

包装

JP-8148

RIPA裂解液（高强度）

100ml

 

使用说明书

1份

【保存条件】

-20℃保存，有效期1年，频繁使用可放置4℃保存。

【概述】

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和ELISA等。
      RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为高强度、中强度、低强度三类。请根据不同需求选择不同强度RIPA裂解液。

【使用建议】

如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。根据使用量，取每1ml RIPA加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用（PMSF现用现加）。

1. 样品前处理：

a)  对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b) 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

c)  对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2. 后处理：将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

【注意事项】

1.     为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.     本产品长时间低温存放可能会出现沉淀，可在37ºC水浴约10分钟以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。

3.     为保证最佳的使用效果，请尽量避免过多的反复冻融，可分装后使用。

4.     裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

5.     RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

6.     该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。