BCA蛋白浓度测定试剂盒-1000T品牌：JinPan | 货号：EK-5001-1000T
BCA Protein Assay Kit
【保存条件】
BCA 试剂 A 室温避光保存 1 年 BCA 试剂 B 室温保存 1 年 蛋白标准品-20℃保存 1 年
【概述】
BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之 一 BCA 法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓 度下限达到 25µg/ml，最小检测蛋白量达到 0.5µg，待测样品体积为 1-20µl。在 50-2000µg/ml 浓度范围内有 较好的线性关系。 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达 5%的 SDS，5%的 Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保 EDTA 低于 10mM，无 EGTA，二硫苏糖醇(DTT) 低于 1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不适用 BCA 法时建议试用本司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
【操作方法】
1.配制 BCA 工作液： 依据样品数量，将试剂 A 和试剂 B 按体积比 50:1 配制适量 BCA 工作液，并充分混匀。 注：配制 BCA 工作液前请将试剂 A 摇晃混匀，观察是否析出结晶，如若析出结晶，可 37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品： 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有 干扰本试剂盒检测的物质，也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。具体如下表：
3.蛋白浓度的检测
a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。
b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl，需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。
c. 各孔加入 195µl BCA 工作液。 37℃放置 30 分钟。
注:也可以室温放置 2 小时，或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应
会因温 度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。
d. 用酶标仪测定 A595，或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在 2小时内测定，2 小时内检测数据无显著变化。
4.数据计算
a.以不同浓度的蛋白标准液为横坐标
b. 以不同浓度的蛋白标准测得 OD 值（多孔则为平均 OD）为纵坐标
c. 建立线性关系，获得公式（如右图中所示(本产品实际检测)，若测得样品 OD=0.6 则 0.6=0.4995x+0.4151，计算得浓度 x=0.37mg/ml）
【注意事项】
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 不同 96 板的吸收值会有不同，得到 OD 有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）。
3. 蛋白标准液（5mg/ml）收到后尽快分装，避免反复冻融。
4. BCA 试剂 A 在低温环境下会析出结晶，可适当 37℃水浴促溶后使用。
5. 请使用 96 孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为 595nm。
本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。
