标签归档：ca

Human C5a ELISA Kit

发表于由

产品编号

PJJP010094
Human C5a ELISA Kit
96次

3198

的Human C5aELISA Kit(Human C5aEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人补体成分C5a酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的C5a的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为17.5pg/ml，与人C3a没有交叉反应，与C3有25%的交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。
补体系统(complement system)是由30多种血浆蛋白和膜蛋白组成，广泛存在于血液、组织液和细胞表面，是一种具有精密调控机制的蛋白反应系统。补体的主要生理功能是促进吞噬细胞的吞噬能力和溶解靶细胞，因此是机体免疫防御机制的重要组成部分。C5a是由蛋白酶C5转化酶将补体组分C5切割成C5a和C5b片段而释放的蛋白质片段，相对分子质量约为11kDa。人的C5a与小鼠和大鼠的C5a分别有60%和54%的同源性。C5起源于肝细胞，但其也可以在巨噬细胞中合成。在巨噬细胞中合成时，可能导致C5a的局部增加。
C5a是一种趋化剂和过敏毒素，是补体裂解片段中显示过敏毒素作用最强的介质，是先天免疫必不可少的一部分，也与适应性免疫有关，其含量的增加与许多炎症性疾病相关。C5a可不依赖肥大细胞释放组胺，而是通过直接作用于血管内皮细胞而增加血管的通透性，刺激平滑肌收缩。高浓度的C5a是中性粒细胞、嗜酸粒细胞和单核细胞的趋化剂，可诱导这些细胞顺浓度梯度方向移动。C5a与C5aR(CD88)结合，激活下游G蛋白偶联的通路，引起中性粒细胞趋化性和内皮细胞的活化。C5a也会引起巨噬细胞与中性粒细胞的急剧氧化。此外，C5a对免疫应答有明显的增强作用，可诱导单核细胞分泌IL-1、IL-6、IL-8及TNF-α等细胞因子，促进抗原及同种异体抗原诱导的T细胞增殖及B细胞产生抗体等。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人C5a的浓度，其原理见图1。人C5a特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人C5a会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人C5a抗体后，生物素化抗人C5a抗体与人C5a结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人C5a浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号
产品名称
包装

PJJP010094-1
人C5a抗体预包被板
8孔×12条

PJJP010094-2
标准品稀释液(5X)
60ml

PJJP010094-3
人C5a标准品
2-4瓶

PJJP010094-4
人C5a生物素化抗体
10ml

PJJP010094-5
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml

PJJP010094-6
洗涤液(20X)
30ml

PJJP010094-7
TMB溶液
10ml

PJJP010094-8
终止液
5ml

PJJP010094-9
封板膜(透明)
2张

PJJP010094-10
封板膜(白色)
2张

—
说明书
1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。/p>
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Human C3a ELISA Kit

发表于由

产品编号

PJJP010091
Human C3a ELISA Kit
96次

3198

的Human C3aELISA Kit(Human C3aEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人补体成分C3a酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的C3a的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为42pg/ml，与人的C5a等没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
补体系统(complement system)是由30多种血浆蛋白和膜蛋白组成，广泛存在于血液、组织液和细胞表面，是一种具有精密调控机制的蛋白反应系统。补体的主要生理功能是促进吞噬细胞的吞噬能力和溶解靶细胞，因此是机体免疫防御机制的重要组成部分。补体C3a是补体固有分子C3的活化裂解产物。在C3转化酶的作用下，C3被激活裂解成C3a和C3b两个具有生物学活性的片段。C3b主要参与补体调理作用。C3a是一个分子量约为65-95kDa、带正电荷的强碱性多肽，它由86个氨基酸组成，具有趋化和激活白细胞，促进白细胞脱颗粒、释放组胺等炎症介质的功能。C3a参与补体系统三个激活途径，包括经典途径、旁路途径和凝集素途径。C3a、C4a、C5a这三种补体激活时产生的活性片段统称为过敏毒素(anaphylatoxin,AT)，它们作为配体能与炎症细胞表面相应受体结合，起到启动、调节炎症反应的作用。
C3a参与先天性免疫和后天获得性免疫过程。在过敏引起的支气管炎性反中，C3a活化肥大细胞和中性粒细胞，触发肥大细胞脱颗粒反应。C3a能增强巨噬细胞及其它细胞对脂多糖引起的前列腺素、细胞因子及趋化因子等分泌的增加。此外，C3a能增强Th2型炎性反应，刺激平滑肌细胞收缩和白细胞的趋化性。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人C3a的浓度，其原理见图1。人C3a特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人C3a会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人C3a抗体后，生物素化抗人C3a抗体与人C3a结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人C3a浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号
产品名称
包装

PJJP010091-1
人C3a抗体预包被板
8孔×12条

PJJP010091-2
标准品稀释液(5X)
60ml

PJJP010091-3
人C3a标准品
2-4瓶

PJJP010091-4
人C3a生物素化抗体
10ml

PJJP010091-5
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml

PJJP010091-6
洗涤液(20X)
30ml

PJJP010091-7
TMB溶液
10ml

PJJP010091-8
终止液
5ml

PJJP010091-9
封板膜(透明)
2张

PJJP010091-10
封板膜(白色)
2张

—
说明书
1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

CIL同位素代理,碳酸钙-40(40Ca)

发表于由
中文名称 碳酸钙-40(40Ca)
英文名称 CALCIUM-40 CARBONATE(40Ca)
分子式 *CaCo3
分子量 100.10
纯度： 98%

货号 规格 目录价/活动价
CALM-3581-PK ME 询价 / 无 询价

CIL提供了大量稳定同位素标记的元素和化合物。同位素富集和化学纯度是特定批次/产品，并备有材料提供。这些产品适用于广泛的应用，包括导电性、农业、植物学、生物样本（如尿液和骨骼）以及通过元素特异性检测（如ICP-MS）进行的定量蛋白质组分析。

CIL同位素代理,碳酸钙-42(42Ca)

发表于由
中文名称 碳酸钙-42(42Ca)
英文名称 CALCIUM-42 CARBONATE(42Ca)
分子式 *CaCo3
分子量 102.01
纯度： 98%

货号 规格 目录价/活动价
CALM-478-PK ME 询价 / 无 询价

CIL提供了大量稳定同位素标记的元素和化合物。同位素富集和化学纯度是特定批次/产品，并备有材料提供。这些产品适用于广泛的应用，包括导电性、农业、植物学、生物样本（如尿液和骨骼）以及通过元素特异性检测（如ICP-MS）进行的定量蛋白质组分析。

CIL同位素代理,碳酸钙-46(46Ca)

发表于由
中文名称 碳酸钙-46(46Ca)
英文名称 CALCIUM-46 CARBONATE(46Ca)
分子式 *CaCo3
分子量 106.01
纯度： 98%

货号 规格 目录价/活动价
CALM-3993-PK ME 询价 / 无 询价

CIL提供了大量稳定同位素标记的元素和化合物。同位素富集和化学纯度是特定批次/产品，并备有材料提供。这些产品适用于广泛的应用，包括导电性、农业、植物学、生物样本（如尿液和骨骼）以及通过元素特异性检测（如ICP-MS）进行的定量蛋白质组分析。

CIL同位素代理,碳酸钙-43(43Ca)

发表于由
中文名称 碳酸钙-43(43Ca)
英文名称 CALCIUM-43 CARBONATE(43Ca)
分子式 *CaCo3
分子量 103.01
纯度： 98%

货号 规格 目录价/活动价
CALM-3685-PK ME 询价 / 无 询价

CIL提供了大量稳定同位素标记的元素和化合物。同位素富集和化学纯度是特定批次/产品，并备有材料提供。这些产品适用于广泛的应用，包括导电性、农业、植物学、生物样本（如尿液和骨骼）以及通过元素特异性检测（如ICP-MS）进行的定量蛋白质组分析。

Rhod-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯（NBS7640）

发表于由

Rhod-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯（NBS7640）

（长波长的可见光钙离子探针）

Rhod-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

货号：NBS7640

规格：50μg

品牌：JinPan

产品描述

Rhod-2是一种高亲和力的可见光激发波长Ca2+荧光探针。类似于Fluo-3或Fluo-4，其激发和发射光谱不会随着Ca2+浓度变化发生明显的迁移，荧光信号一旦与Ca2+结合后明显增强。不同于Fluo-3或Fluo-4，Rhod-2的波长更长（Ex/Em=549/578 nm），这一特性使其更适合具高水平自荧光信号细胞或组织的Ca2+水平检测，还可用来检测由光感受器和笼锁Ca2+螯合剂光激活导致的Ca2+释放。


Rhod-2, AM是Rhod-2的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Rhod-2，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供，使用时只需经无水DMSO充分溶解，配置成2~5mM的储存液，并依据具体实验和相关文献资料调整到需要的工作浓度即可。

 

主要特征：

1）   长波长钙离子探针，能够与GFP和绿色荧光探针兼容；

2）   特别定位在线粒体。以罗丹明结构为基础的Rhod-2 AM带正电荷，以电位驱动的方式吸收聚集在线粒体，荧光显微镜下观察加载进入细胞呈现点状染色模式。有文献认为，Rhod-2是线粒体Ca2+的选择性探针，不过这一理论并未得到广泛支持。

3）   检测平台：荧光成像，流式细胞术，酶标仪，高内涵筛选（HCS）

 

基本特性：

1）   CAS NO：129787-64-0

2）   化学名：9-[4-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-3-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2- oxoethyl]amino]phenoxy]ethoxy]phenyl]-3,6-bis(dimethylamino)-xanthylium, monobromide

3）   同义名：Rhod-2, Acetoxymethyl Ester 

4）   分子式：C52H59N4O19Br

5）   分子量：1123.96

6）   外观：红色固体

7）   最大激发/发射波长：549/578 nm

8）   Kd（Ca2+结合）：570NM

9）   溶解性：溶于DMSO（2~5mM）

10）化学结构式：Rhod-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯（NBS7640）

 

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，至少一年有效。

运输：室温运输。

 

注意事项

1）   荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）   Rhod-2从低浓度Ca2+到高浓度Ca2+的荧光增强程度低于Fluo-3，另外，Rhod-2的荧光信号弱于Fluo-3。

3）   乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

4）   Rhod-2, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

5）   Rhod-2, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。


A， 试剂准备

1）  配制Pluronic F-127母液：称取100mg Pluronic F-127粉末中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2）  HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液


B，操作步骤

1）   用无水DMSO溶解Rhod-2, AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Rhod-2, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Rhod-2, AM中加入11.1µl 无水DMSO）。准备Rhod-2, AM工作液之前，有时需要往Rhod-2, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

【注①】：Rhod-2, AM染色工作液制备前，添加等体积20% Pluronic F-127溶液到Rhod-2, AM+DMSO储存液，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%。

【注②】：Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

2）   用HHBS或其他生理缓冲液将 Rhod-2, AM+DMSO储存液稀释到1-10µM的工作液。

【注①】：Rhod-2,AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Rhod-2, AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3）  【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone，0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整pH。

4） 将准备好的Rhod-2, AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。37℃孵育20min-2h。

【注①】：若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解AM，从而降低Rhod-2, AM加载效果。而含酚红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗2~3次。

【注②】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30min，看荧光效果；如果细胞死亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注③】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 室温再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7） 用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪，以及波长Ex/Em=549/578 nm来进行检测。



Rhod-2 AM的应用实例：

1）   应用目的：用Ca2+荧光探针Rhod-2 AM（NBS7640）检测顺铂（cisplatin）敏感SKOV3细胞和顺铂耐性SKOV3/DDP细胞内线粒体Ca2+水平的变化。

Rhod-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯（NBS7640）

Fig 1. 顺铂或ATP处理诱导SKOV3细胞线粒体Ca2+内流，并非SKOV3/DDP细胞。A）两种细胞系分别用ATP诱导处理，时间序列扫描检测线粒体Ca2+变化，通过共聚焦显微镜得到数据。B）细胞用6 μg/ml顺铂处理0h，8h和16h后用共聚焦显微镜检测（bar，20 μm）。


2）   应用目的：用Ca2+荧光探针Rhod-2 AM（NBS7640）检测顺铂（cisplatin）对HeLa细胞线粒体Ca2+水平的变化。

Rhod-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯（NBS7640）

Fig 2. 顺铂增加细胞浆和线粒体内游离Ca2+水平。A）HeLa细胞用顺铂（2.5, 5 or 10 µg/ml）处理0h，6h，12h和24h后，用荧光钙离子探针Fluo-4 AM孵育。细胞浆Ca2+浓度用共聚焦显微镜观察（bar，40 μm）。B）Fluo-4 AM定量检测细胞浆内游离Ca2+水平。C）HeLa细胞用顺铂（2.5, 5 or 10 µg/ml）处理0h，6h，12h和24h后，用荧光钙离子探针Rhod-2 AM孵育。线粒体Ca2+浓度用共聚焦显微镜观察（bar，40 μm）。D）Rhod-2 A定量检测线粒体内游离Ca2+水平。

0.5M EGTA溶液，pH8.0，无菌（NBS1625）

发表于由

0.5M EGTA溶液，pH8.0，无菌

货号：NBS1625

规格：100ml

品牌：JinPan

乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸，简称为EGTA。可用于选择性螯合Ca²⁺，尤其适用于在Mg²⁺存在下测定Ca²⁺，因为EGTA与Ca²⁺极其稳定，与Mg²⁺结合不稳定，是常用分子生物学试剂。

本产品由EGTA、去离子水组成，调pH至8.0经高压灭菌处理。

使用方法(仅供参考):

按实验具体要求操作。

注意事项：

1、实验要求无菌时，应注意无菌操作。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件: 

常温保存，一年有效。