Cellufine™ ET clean是一款把聚(ε-赖氨酸)為配基固定在繊維素基球上的層析填料。 這種填料可選択性的結合様品中混入的内毒素並将其去除。 配基(聚ε-赖氨酸)来源於放線菌(Streptomyces albulus)生産的25-35个赖氨酸聚合物。
Cellufine™ ET clean内毒素去除填料是由熊本大学和Chisso株式会社共同开发的。聚赖氨酸被固定在氯甲基环氧乙烷活化的纤维素基球上, 其在用0.2 M NaOH和2 M NaCl的清洗液洗浄後依然保持非常安定的親和活性。
Cellufine™ ET clean可在生理pH下从细胞产物溶液中去除内毒素,离子强度μ= 0.02-1.0,0°-25C°
通过Cellufine™ ET clean樹脂从蛋白质溶液中特异性去除内毒素
样品溶液 | Cellufine™ ET clean S | Cellufine™ ET clean L | |||
样品名称(pI) | 处理前内毒素浓度(pg/ml) | (0.02M PB, pH7.0, μ=0.05) | (0.02M PB + 0.36M NaCl, pH7.0, μ=0.40) | ||
处理后内毒素浓度(pg/ml) | 蛋白质回收(%) | 处理后内毒素浓度(pg/ml) | 蛋白质回收(%) | ||
卵清蛋白(4.6) | 28,000 | 81 | 99 | <10 | 95 |
牛血清白蛋白(4.9) | 32,000 | 45 | 99 | <10 | 97 |
肌红蛋白(6.8) | 4,500 | 18 | 99 | <10 | 98 |
丙种球蛋白(7.4) | 5,600 | 20 | 99 | <10 | 97 |
细胞色素C(10.6) | 1,500 | 15 | 99 | <10 | 98 |
将 2 ml 蛋白质溶液(1 mg/ml,LPS:各种蛋白质试剂中的污染物)添加到 0.3 mL ET clean 中。1 个内毒素单位 (EU) = 250pg LPS 可以换算。
溶菌酶 / ETclean L
柱层析
柱尺寸
10 x 0.9 cm (I.D.) (9.6 ml)
流速
0.5 ml / min (47 cm / h)
缓冲液
1 mM Tris-HCl, pH 7.3
梯度洗脱液
0 → 1.0 mol / l NaCl aq.
測定
– 280nm蛋白测定
– ET LAL法内毒素测定
注射样品 (1ml)
14 mg / ml