含Capping结构的高活性mRNA

CleanCap^® mRNA

TriLink BioTechnologies开发的CleanCap^® mRNA是一种包被了特定蛋白的加帽mRNA。

本系列产品有Cas9、Cre、EGFP、Luciferase、mCherry、β-gal、EPO、OVA（ovalbumin）可供选择。

TriLink公司的CleanCap^® mRNA能够作为高活性的mRNA使用，通过Capping（加帽）避免生物体内发生免疫应答，改善in vivo条件下的翻译效率。

◆CleanCap^® 是什么？：为mRNA添加Cap 1 结构

TriLink公司的CleanCap^® mRNA可以通过在mRNA上添加Capping结构（Cap 1）来避免生物体内发生免疫应答，从而合成具有高翻译效率的mRNA。

◆TriLink公司的CleanCap^® mRNA特点

1.　加帽效率高达94%+，可获得更高活性的mRNA。

2.　不会激活模式识别受体，可避免免疫应答

3.　相较于Cap 0结构（ARCA法加帽），in vivo条件下的翻译效率得到了大幅改善

4.　相较于酶加帽法，所需成本大幅降低

5.　加帽修饰mRNA产品系列丰富

◆CleanCap^®和ARCA(Anti-reverse capping analog)法的比较

将从以下两点比较ARCA法和CleanCap^®加帽的mRNA。

●　加帽效率

●　细胞内蛋白的表达量

加帽效率的比较

分别使用CleanCap^®和ARCA加帽表达Fluc的mRNA，比较两者的加帽效率。

结果显示，使用CleanCap^® 获得的加帽效率比ARCA法高。

CleanCap®	ARCA
90-99%	60-80%

细胞内蛋白表达水平的比较

分别使用CleanCap^®和ARCA法加帽表达EGFP的mRNA后，使其在细胞内表达，并通过荧光显微镜进行观察。

比较以下5种细胞：CHO cells、Foreskin fibroblast cells、iPS derived cardiomyoctyes、Jurkat、MCF 10A

结果显示，无论在哪一种细胞中，使用CleanCap^®加帽的EGFP mRNA的蛋白表达水平都更高。

	ARCA EGFP mRNA	CleanCap® EGFP mRNA
CHO Cells    6 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit    1μg mRNA    72 h post fusion
Foreskin fibroblast cells,    10 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit    1μg mRNA    24 h post fusion
iPS derived cardiomyoctyes,    10 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit    1μg mRNA    24 h post fusion
Data courtesy of Beniag

	ARCA EGFP mRNA	CleanCap® EGFP mRNA
Jurkat: 500ng    mRNA + 1µL    jetMESSENGER
MCF 10A: 500ng    mRNA + 1µL    jetMESSENGER
Data courtesy of Polyplus-transfection

CleanCap^®与酶加帽法的制备成本比较

计算4 mL（2 mg）和1 mL（400 μg）两种规格制备加帽mRNA时所需的成本。

结果显示，CleanCap^®与酶加帽法相比，生产成本更低。

◆与修饰mRNA的组合：置换尿苷

为使mRNA能够高效表达，需最大限度地去除mRNA序列中的Uridine（尿苷），并将残留的Uridine置换为Pseudo Uridine（PseudoU，假尿苷）或5-methoxy Uridine(5moU，5-甲氧基尿苷)。

TriLink公司可提供多种CleanCap^®与Pseudo Uridine、5-methoxy Uridine组合的mRNA产品。

Thp-1 Dual Cells (InvivoGen)

准备2种表达Fluc的mRNA，正常序列（Standard Fluc）与尽可能去除尿苷的序列（U depleted Fluc），比较两者的表达水平。

此外，在没有进行尿苷置换（wt）、置换为Pseudo Uridine（PseudoU）和置换为5-methoxy Uridine（5moU）的条件下进行比较。

结果显示，在U depleted Fluc（尽可能去除尿苷的序列）和置换为5-methoxy Uridine（5moU：甲氧基尿苷）的序列中，Fluc的表达水平更高。

◆RNA定制合成服务

TriLink公司可提供RNA定制合成服务：化学合成短链RNA服务、转录合成长链RNA。定制项目包含加帽、修饰碱基、缓冲液组成、纯化方法开发等。从使用修饰碱基的向导RNA合成到大规模mRNA合成服务均可提供，可满足客户广泛的需求。

mRNA定制合成（in vitro转录合成）的服务内容

目标回收量：1 mg~

修饰碱基：Pseudouridine, 5-Methoxyuridine, 5-Methylcytidine/Pseudouridine等

加帽试剂：CleanCap^®

定制示例

●　只需ORF序列的mRNA合成

●　UTR序列和ORF序列的mRNA合成

欢迎与我们联系，进一步了解定制服务。

◆关于TriLink BioTechnologies

TriLink BioTechnologies是一家位于美国圣地亚哥的试剂、药物生产定制公司，专注于核酸、寡核苷酸、加帽类似物的生产和长链RNA合成。

CleanCap^® mRNA是TriLink研发的新型共转录加帽法，与常规加帽法相比，可实现高加帽效率和高蛋白表达效率。

TriLink生产符合ICH Q7以及ISO 9001:2015。

◆产品列表

Cas9 mRNA

产品编号	产品名称	产品规格
550-33824	CleanCap Cas9 mRNA	1 mg
552-33823		100 μg
558-33744	CleanCap Cas9 mRNA (5moU)	1 mg
550-33743		100 μg
555-33754	CleanCap Cas9 Nickase mRNA (5moU)	1 mg
551-33751		20 μg
557-33753		100 μg

Cas9 mRNA是在Broad、MIT、Harvard、Iowa、UTokyo以及Rockefeller授予的限制性许可下提供的产品。

Cre mRNA

产品编号	产品名称	产品规格
555-33793	CleanCap Cre mRNA (5moU)	1 mg
559-33791		100 μg

EGFP mRNA

产品编号	产品名称	产品规格
555-33793	CleanCap EGFP mRNA	1 mg
559-33791		100 μg
552-33703	CleanCap EGFP mRNA (5moU)	1 mg
556-33701		100 μg

mCherry mRNA

产品编号	产品名称	产品规格
556-33723	CleanCap mCherry mRNA (5moU)	1 mg
550-33721		100 μg

Luciferase mRNA

产品编号	产品名称	产品规格
555-33813	CleanCap FLuc mRNA	1 mg
559-33811		100 μg
559-33713	CleanCap FLuc mRNA (5moU)	1 mg
553-33711		100 μg
553-33733	CleanCap Renilla mRNA (5moU)	1 mg
557-33731		100 μg

β-gal mRNA

产品编号	产品名称	产品规格
559-33833	CleanCap beta gal mRNA	1 mg
553-33831		100 μg
554-33763	CleanCap beta gal mRNA (5moU)	1 mg
558-33761		100 μg

EPO mRNA

产品编号	产品名称	产品规格
559-33774	CleanCap EPO mRNA (5moU)	1 mg
551-33773		100 μg

OVA mRNA

产品编号	产品名称	产品规格
558-35503	CleanCap Ova mRNA	1 mg
552-35501		100 μg
558-33783	CleanCap Ova mRNA (5moU)	1 mg
552-33781		100 μg

◆相关产品

加帽试剂

产品编号	产品名称	产品规格
559-35511	CleanCap Reagent AG	1 μmol
553-35514		5 μmol
555-35513		10 μmol
553-35531	CleanCap Reagent (3' OMe) AG	1 μmol
557-35534		5 μmol
559-35533		10 μmol

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