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JNC株式会社 CellufineTMPhosphate 亲和层析填料

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CellufineTMPhosphate
用于纯化核酸结合蛋白，例如 T7 RNA 聚合酶，它是一种合成 mRNA 药物的酶

Cellufine Phosphate是一款亲和填料，旨在浓缩，纯化蛋白以及与核酸相关的蛋白质之类的酶。 填料是将磷酸酯配基固定在具有良好刚性的纤维素微球上而成。 由于 T7 RNA 聚合酶是 mRNA 药物的合成酶，是一种核酸结合蛋白，因此可以通过细胞细磷酸盐高效纯化。

T7 RNA聚合酶纯化实例Purification of T7 RNA polymerase

T7 RNA 聚合酶是一种关键的 RNA 合酶，用于在体外转录合成中从模板 DNA 合成 mRNA。 在这种情况下，高纯度T7 RNA聚合酶通过两步层析步骤纯化， 首先用Cellufine MAX DEAE进行粗纯化，然后用Cellufine Phosphate进行亲和纯化。

利用从Cellufine MAX DEAE和Cellufine Phosphate的各精制工序中得到的馏分，然后用SDS-PAGE对精制进行评价。 每经过一个层析工序，杂质杂质就会被去除，而在用Cellufine Phosphate精制的阶段，精制得到的T7 RNAP纯度几乎达到单频带，非常高。

色谱分析

层析柱
1.6x10cm (20ml) 装填 Cellufine Phosphate
流速
3ml/min( 90cm/h )
样品
7.5mg经肝素琼脂糖填料纯化后的RusA D70N
梯度
200ml 50mM tris-HCl pH 8.0，氯化钠浓度从0.1-1.3M

聚丙烯酰胺凝胶电泳

凝胶
4-12%浓度的梯度胶，使用MES-SDS缓冲液(Invitrogen)
电泳胶顺序
1 细胞提取液
2 肝素琼脂糖层析柱流穿
3 肝素琼脂糖纯化样
4-6 Cellufine Phosphate纯化样
7 RusA标准对照样
8 Mark 12 对照分子量标准品 (Invitrogen)

JNC株式会社 CellufineTMET clean 亲和色谱填料用于去除内毒素Cellufine™ ET clean S Cellufine™ ET clean L

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Cellufine™ ET clean是一款把聚（ε-赖氨酸）為配基固定在繊維素基球上的層析填料。 這種填料可選択性的結合様品中混入的内毒素並将其去除。 配基（聚ε-赖氨酸）来源於放線菌（Streptomyces albulus）生産的25-35个赖氨酸聚合物。

Cellufine™ ET clean内毒素去除填料是由熊本大学和Chisso株式会社共同开发的。聚赖氨酸被固定在氯甲基环氧乙烷活化的纤维素基球上， 其在用0.2 M NaOH和2 M NaCl的清洗液洗浄後依然保持非常安定的親和活性。

Cellufine™ ET clean可在生理pH下从细胞产物溶液中去除内毒素，离子强度μ= 0.02-1.0，0°-25C°

通过Cellufine™ ET clean樹脂从蛋白质溶液中特异性去除内毒素

样品溶液 Cellufine™ ET clean S Cellufine™ ET clean L
样品名称(pI) 处理前内毒素浓度(pg/ml) (0.02M PB, pH7.0, μ=0.05) (0.02M PB + 0.36M NaCl, pH7.0, μ=0.40)
处理后内毒素浓度(pg/ml) 蛋白质回收(%) 处理后内毒素浓度(pg/ml) 蛋白质回收(%)
卵清蛋白(4.6) 28,000 81 99 <10 95
牛血清白蛋白(4.9) 32,000 45 99 <10 97
肌红蛋白(6.8) 4,500 18 99 <10 98
丙种球蛋白(7.4) 5,600 20 99 <10 97
细胞色素C(10.6) 1,500 15 99 <10 98

将 2 ml 蛋白质溶液（1 mg/ml，LPS：各种蛋白质试剂中的污染物）添加到 0.3 mL ET clean 中。1 个内毒素单位 (EU) = 250pg LPS 可以换算。

溶菌酶 / ETclean L

柱层析

柱尺寸
10 x 0.9 cm (I.D.) (9.6 ml)
流速
0.5 ml / min (47 cm / h)
缓冲液
1 mM Tris-HCl, pH 7.3
梯度洗脱液
0 → 1.0 mol / l NaCl aq.
測定

– 280nm蛋白测定
– ET LAL法内毒素测定

注射样品 (1ml)
14 mg / ml

JNC株式会社 亲和色谱填料 CellufineTMSulfate 用于病毒、病毒/微生物抗原和肝素结合蛋白的浓缩、纯化以及去除内毒素

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疫苗和临床诊断方面的进步已经产生了对大量高纯度和浓缩的病毒以及病毒或微生物抗原的日益增长的需求。 Cellufine Sulfate亲和填料是一种简单、快速、有效的浓缩、纯化和去除這些重要产品的热原。

Cellufine Sulfate不仅可消除传统的超速离心沉降法和密度梯度方法的繁琐、耗时和潜在的不安全性，还能显著提高浓度和纯度。 Cellufine Sulfate可以减少或消除与固定化硫酸葡聚糖、硫酸软骨素或肝素有关的损耗、配体泄漏和重现性问题。

通过离子强度的简单逐步或梯度增加来影响结合产物的洗脱。

特征
Features
对多种活病毒、灭活的或结构分裂的病毒、微生物抗原和肝素结合蛋白具有亲和力。
封闭柱操作确保安全性和产品无菌
内毒素不结合，可快速和无污染的去除热原
刚性，高强度微球
可高压灭菌

优势
Benefit
比超速离心更有效去除培养基和宿主细胞中的污染物
避免过多的产品处理和安全问题，尤其是病毒制剂
同时浓缩和纯化可提高产量，减少加工步骤，时间和成本
温和的结合和洗脱条件提供高容量和产品产量
抗压缩，即使在大型色谱柱中也能为高速处理提供快速流动，使其易于放大
耐碱性化学除热原，可用福尔马林化学灭菌

特点
基质 纤维素
粒径 ca. 40 – 130 µm
颗粒形状 球形
排阻极限 3kD
活化基团 硫酸酯
总硫 >700 µg/g dry
蛋白
溶菌酶 : >3 mg/ml
乙型肝炎表面抗原 : 7 mg/ml
环境耐受性 耐0.1M NaOH，含有0.1％的37％福尔马林
工作压力 <0.3 MPa
高温高压灭菌 在中性pH下悬浮; 121°C 30分钟
存储 14%的乙醇悬浮液

 

JNC株式会社 CellufineTMSPA-HC 用于抗体纯化的蛋白A亲和填料

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蛋白A介质往往用于抗体制药的第一步纯化。 在该步骤中，需要在短时间内将大量培养上清液中的抗体进行富集纯化。下面描述的高性能蛋白A介质将是非常好的一个选择。

1. 高流速下具有高动态结合能力
2. 高流速时的低背压
3. 优异的重复使用寿命
Cellufine™ SPA-HC 填料的配基为耐碱蛋白A。為了大分子抗体利於通過，利用基球的交联技术這款填料具備低背压和很高的大孔径分布率。
通过40多年的色谱行业经验获得的独特纤维素微球制造技术，该技术使填料在高流速下依然可以实现高动态结合能力。
Cellufine SPA-HC的开发可用于生产规模。 因此，在您现有的设备基础上可以大幅缩短纯化时间。

JNC株式会社 CellufineTMSPA-HC 用于抗体纯化的蛋白A亲和填料

名称 特征
配体 大肠杆菌表达生产的亲和配体耐碱蛋白 A
基质 高度交联的纤维素微球
粒径 平均直径70μm
配体偶联方法 甲酰基偶联
流速 ≥650cm/ h（0.3MPa），10cmID×20cmL，24℃
动态结合載量（DBC） ≧ ≥70mg/ ml（DBC C 10，多克隆免疫球蛋白G）1
CIP溶液 0.1 M NaOH
温度稳定性 4 – 50℃储存1周后性能无明显变化。
储存 2-8℃，14％（v / v）乙醇
化学稳定性 在30％（v / v）异丙醇，20-70％（v / v）乙醇，8M尿素，6M盐酸胍或0.1M醋酸下储存1周后性能无显着变化
pH工作范围 3—12

CellufineTMSPA-HC对不同种类的单克隆抗体都具有优异的特异亲和力

　　使用具有不同等电点（pI）和亚型的单克隆抗体用于研究分子电荷状态是否对填料的动态结合能力有影响。