产品编号
PC125
Mouse CCL2/JE/MCP-1 ELISA Kit
96次
2798
的Mouse?CCL2/JE/MCP-1?ELISA?Kit?(Mouse?Monocyte?Chemoattractant?Protein1?Enzyme-Linked?
ImmunoSorbent?Assay?Kit)，即小鼠单核细胞趋化蛋白1酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆、或细胞培养上清液中的MCP-1的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为16.2pg/ml，与小鼠MCP-2、MCP-3、MCP-4、人MCP-1、MCP-5、MARC等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
小鼠JE基因最初被认为是小鼠成纤维细胞中血小板来源的生长因子诱导基因。JE基因所编码的蛋白都属于炎性细胞因子或免疫调节细胞因子，属于CC趋化因子家族。在所有CC趋化因子家族成员中，JE在结构上和功能上都与MCP/eotaxin具有一定相关性。在MCP/eotaxin亚族中，已经发现的成员有人MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4和eotaxin以及小鼠JE/MCP-1、MCP-3/MARC、MCP-5和eotaxin。成熟的人MCP-1与小鼠JE、MARC、MCP-5分别具有55%、59%和66%的氨基酸同源性。
单核细胞趋化蛋白(Monocyte?Chemoattractant?Protein?1, MCP-1)，也被称为单核细胞趋化与激活因子(Monocyte Chemotactic and Activating Factor, MCAF)。小鼠MCP-1 cDNA编码产生148个氨基酸的前体蛋白，经剪切掉23个氨基酸的信号肽后得到成熟的小鼠MCP-1。与人MCP-1相比，小鼠MCP-1具有49个氨基酸的羧基端延伸，主要由丝氨酸和苏氨酸构成，MCP-1的羧基端被证实并非MCP-1发挥活性所必需。除了成纤维细胞、星形胶质细胞和上皮细胞外，小鼠MCP-1在巨噬细胞、肥大细胞、内皮细胞、成骨细胞和成釉质细胞上也有所表达。小鼠MCP-1的表达主要受到炎性刺激因子和TNF-α、IL-1、IFN-γ和PDGF等细胞因子的影响。
小鼠MCP-1是一种有效的单核细胞，巨噬细胞和淋巴细胞化学引诱物。MCP-1能够调节Th1/Th2淋巴细胞分化，通过刺激IL-4的产生从而抑制IL-2分泌，促进Th2细胞生成。G蛋白偶联受体CCR2参与调节MCP-1的活性，小鼠CCR2?cDNA编码产生373个氨基酸长度的蛋白，与人MCP-1受体CCR2B具有80%的氨基酸同源性。单核细胞和巨噬细胞表面表达大量的CCR2。
MCP-1与受体结合后能够通过活化Smad3和JP42/44?MAPK及PI3K/AKT通路影响肿瘤细胞的迁移和存活，还能够影响ERK1/ERK2/JNK-AP1和NF-κB信号通路发挥作用。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich?ELISA)检测样品中小鼠MCP-1的浓度，其原理见图1。小鼠MCP-1特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠MCP-1会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠MCP-1抗体后，生物素化抗小鼠MCP-1抗体与小鼠MCP-1结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠MCP-1浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中小鼠MCP-1浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
产品编号
产品名称
包装
PC125-1
小鼠CCL2/JE/MCP-1抗体预包被板
8孔×12条
PC125-2
样品分析缓冲液
5ml
PC125-3
标准品稀释液
10ml
PC125-4
小鼠CCL2/JE/MCP-1标准品
2-4瓶
PC125-5
小鼠CCL2/JE/MCP-1生物素化抗体
10ml
PC125-6
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml
PC125-7
洗涤液(20X)
30ml
PC125-8
TMB溶液
10ml
PC125-9
终止液
5ml
PC125-10
封板膜(透明)
2张
PC125-11
封板膜(白色)
2张
–
说明书
1份
保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。