产品编号

JJP70
Human TotalMMP-3 ELISA Kit
96次

3198

的Human Total MMP-3 ELISA Kit (Human Total MMP-3 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人总基质金属蛋白酶3酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的总MMP-3 (pro- and active)的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为54pg/ml，与人的MMP-1，MMP-2， MMP-7，MMP-8，MMP-9，MMP-13，TIMP-1均没有交叉反应，与人的MMP-10有2%的交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)又称为Matrixins，是锌和钙依赖的内肽酶家族，参与细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的降解，在胚胎发育、形态发生、生殖和组织重塑等许多生理过程及关节炎、癌症和心血管疾病等病理过程中发挥重要作用。
基质金属蛋白酶3 (MMP-3)又称基质分解素1 (stromelysin-1)，是MMP家族的重要成员之一，全长477个氨基酸，分子量约为57kDa，活性部分分子量约为45kDa。依据结构特点，MMP-3可分为3个结构域：(1)氨基端前肽区：由信号肽(1-17aa)和前肽(18-99aa)组成。全长MMP-3称为pre-pro-MMP-3，信号肽可引导新合成的pre-pro-MMP-3向细胞膜运动；在翻译过程中信号肽被去除成为前体MMP-3 (pro-MMP-3)，而前肽“半胱氨酸开关”基序的半胱氨酸与Zn2+协调，以保持pro-MMP-3处于潜在的非活性形式；前体MMP-3被纤溶酶(plasmin)、胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)等蛋白水解酶切割去除半胱氨酸开关，而激活成活性MMP-3。(2)氨基末端催化区：由一个铰链区与氨基末端前肽区相连，含有Zn2+基序，为整个蛋白酶的活性部位；(3)羧基末端结构域：其氨基酸序列与血红素结合蛋白相似，是MMP-3与底物相结合的部位。MMP-3能够降解多种细胞外基质成分，破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，释放E-钙粘蛋白(E-cadherin)，促进肿瘤侵袭转移，在肿瘤研究中日益受到重视。此外，MMP-3还参与组织形态发生、损伤修复、炎症反应等一系列生理、病理过程，在风湿性关节炎、动脉粥样硬化等疾病发生及进展过程中发挥重要作用。
研究表明，类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者血清中MMP-3浓度明显高于健康患者，可作为类风湿性关节炎疾病活动性、影像学检测、疾病结局可预测性和治疗反应的可靠标志物。强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)也与MMP-3密切相关，MMP-3指标即可以反应AS患者关节骨质破坏，又能更好地反映疾病活动程度，可作为AS疾病进展与改善的血清学指标。此外，骨关节炎(osteoarthritis, OA)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)、神经胶质瘤、眼部肿瘤、乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、肝癌，甚至于新冠肺炎等疾病过程中亦伴随着MMP-3表达水平的变化。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人总MMP-3的浓度，其原理见图1。人MMP-3特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人MMP-3会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人MMP-3抗体后，生物素化抗人MMP-3抗体与人MMP-3结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人MMP-3浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号
产品名称
包装

JJP70-1
人MMP-3抗体预包被板
8孔×12条

JJP70-2
样本分析缓冲液
5ml

JJP70-3
标准品稀释液(5X)
10ml

JJP70-4
人MMP-3标准品
2-4瓶

JJP70-5
人MMP-3生物素化抗体
10ml

JJP70-6
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml

JJP70-7
洗涤液(20X)
30ml

JJP70-8
TMB溶液
10ml

JJP70-9
终止液
5ml

JJP70-10
封板膜(透明)
2张

JJP70-11
封板膜(白色)
2张

—
说明书
1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品编号

JJP70
Human MMP-2 ELISA Kit
96次

3198

的Human MMP-2 ELISA Kit (Human Matrix Metalloproteinase2 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人基质金属蛋白酶2酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的MMP-2的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为0.375ng/ml，与MMP-1、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-12、MMP-13、TIMP-1、TIMP-4等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase, MMP)，是一种Zn2+和Ca2+依赖的肽链内切酶，参与细胞外基质降解和多种生物学过程。MMPs在胚胎发育、形态发生和组织重构等生理过程中具有重要作用。MMPs同样也参与炎症、肿瘤和心血管疾病等病理过程。MMP-2在机体发育过程中表达广泛，在组织受损、炎症发生时表达会出现上升，另外，在肿瘤细胞转移目标部位的基质细胞中表达含量也会升高。MMP-2在体内能够促进肿瘤新生血管的生成，促进肿瘤转移。
人基质金属蛋白酶2(Matrix?Metalloproteinase?2,?MMP-2)以非糖基化的酶原形式分泌，分子量在72kDa。Pro-MMP-2包含80个氨基酸的前导肽和551个氨基酸的成熟区域。在基膜型MMPs、丝氨酸蛋白酶凝血酶或Protein C的催化作用下，前导肽会被除去。活化的MMP-2含有一个催化区域和C端的hemopexin-like区域。无论是酶原还是成熟的MMP-2都与小鼠pro-MMP-2、大鼠pro-MMP-2、猪pro-MMP-2和犬pro-MMP-2具有96-97%的氨基酸同源性。
MMP-2的内源性抑制剂主要有α2巨球蛋白和金属蛋白酶组织抑制剂(Tissue?Inhibitor?of?Metalloproteinase,?TIMPs)。TIMPs1-4通过与MMP-2的N端催化区域形成紧密的非共价键连接来抑制MMP-2活性。另外，TIMP-2或TIMP-3能与pro-MMP-2和MT-MMPs在细胞表面形成三元复合物，抑制MMP-2活性。
与MMP-9一起，MMP-2能够降解细胞基底膜的主要组成成分：明胶和II型胶原蛋白。此外，MMP-2还能降解基质蛋白如：V、VII、X型胶原蛋白，弹力蛋白和纤连蛋白等。同时，MMP-2还能调控肾上腺髓质素、内皮素、降钙素基因相关肽、CCL7/MCP-3、CXCL12/SDF-1、半乳糖凝集素3、IGFBP-3、IL-1β、S100A8和S100A9等血管活性因子和促炎因子功能。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich?ELISA)检测样品中人MMP-2的浓度，其原理见图1。人MMP-2特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人MMP-2会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人MMP-2抗体后，生物素化抗人MMP-2抗体与人MMP-2结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人MMP-2浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人MMP-2浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号

产品名称

包装

JJP70-1

人MMP-2抗体预包被板

8孔×12条

JJP70-2

标准品稀释液(5X)

20ml

JJP70-3

人MMP-2标准品

2-4瓶

JJP70-4

人MMP-2生物素化抗体

10ml

JJP70-5

辣根过氧化物酶标记Streptavidin

10ml

JJP70-6

洗涤液(20X)

30ml

JJP70-7

TMB溶液

10ml

JJP70-8

终止液

5ml

JJP70-9

封板膜(透明)

2张

JJP70-10

封板膜(白色)

2张

–

说明书

1份

保存条件：
标准品4oC保存，1-2周内有效，-20oC保存6个月内有效；试剂盒其它组份4oC保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组份严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。