产品编号
JJP75
Human/Rat PDGF-BB ELISA Kit
96次
3198
的Human/Rat PDGF-BB ELISA Kit (Human/Rat Platelet-Derived Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人/大鼠血小板源性生长因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人或大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的PDGF-BB的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为18pg/ml，与人FGF acidic、FGF basic、FGF-4、G-CSF、GM-CSF、HGF、IFN-γ、IGF-I、IGF-II等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
血小板源性细胞因子(Platelet-Derived?Growth?Factor,?PDGF)家族成员包括4个同源二聚体PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-CC、PDGF-DD和一个异源二聚体PDGF-AB。这些蛋白和相关的VEGF家族蛋白具有共同的保守PDGF/VEGF同源区域，该区域中包含高度保守的半胱氨酸残基。PDGF-B以前体蛋白原的形式合成，包含有信号肽，成熟区域，N端前体肽和C端的延伸区域。大多数细胞都能产生PDGF-A和PDGF-B链，两种肽链在内质网中通过二硫键连接形成无活性的同源或异源二聚体前体。随后在反面高尔基体网中，经过酶切作用形成有活性的成熟蛋白。能够产生PDGF-B的细胞主要有巨核细胞、成纤维细胞、角质细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞神经元细胞、施万细胞和巨噬细胞等。成熟的人PDGF-BB与犬PDGF-BB和小鼠PDGF-BB分别具有96%和89%的氨基酸同源性。
PDGF家族蛋白通过与受体结合参与调控多种细胞功能，PDGF受体包含两个亚基，PDGF?Rα和PDGF?Rβ，PDGF-BB与受体?结合后能够诱导两种亚基发生同源或异源二聚化，主要参与调控发育和再生过程。血液中的PDGF主要来自于血小板，当血小板激活后，便会分泌产生大量的PDGF。。
PDGF-BB与受体结合后，首先发生受体自身酪氨酸残基的磷酸化，随后在细胞质酪氨酸激酶、磷脂酶C-γ和SHp-2的参与下，激活包括MAPK、PKB/Akt在内的一系列酶联反应。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich?ELISA)检测样品中PDGF-BB的浓度，其原理见图1。PDGF-BB特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的PDGF-BB会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗PDGF-BB抗体后，生物素化抗PDGF-BB抗体与PDGF-BB结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。PDGF-BB浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中PDGF-BB浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
产品编号
产品名称
包装
JJP75-1
PDGF-BB抗体预包被板
8孔×12条
JJP75-2
样品分析缓冲液
5ml
JJP75-3
标准品稀释液
10ml
JJP75-4
PDGF-BB标准品
2-4瓶
JJP75-5
PDGF-BB生物素化抗体
10ml
JJP75-6
辣根过氧化物酶标记Streptavidin
10ml
JJP75-7
洗涤液(20X)
30ml
JJP75-8
TMB溶液
10ml
JJP75-9
终止液
5ml
JJP75-10
封板膜(透明)
2张
JJP75-11
封板膜(白色)
2张
–
说明书
1份
保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。