Phos-tag™ Biotin  无特异性磷酸化抗体时的好选择

Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，可用于免疫印迹法检测磷酸化蛋白。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。

◆原理

◆优点、特色

●  无辐射。

●  无需PVDF膜的封闭处理。

●  Phos-tag™ 的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。

●  可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作。

●   Phos-tag™ BTL母液可稳定保存至少6个月。

●  实验流程与使用HRP标记抗体相类似。

※BTL-104、BTL-105、BTL-111三者连接链（Linker）长度不一，但使用上基本相同。BTL-111灵敏度最高。

◆案例、应用

【使用例：在PVDF 膜上检测磷酸化蛋白】

转印在PVDF 膜上的磷酸化蛋白可精确检测到ng级水平，没有检测到相应的去磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白的信号斑点。

免疫印迹检测磷酸化蛋白——Phos-tag ™ 生物素。

摘自Eiji Kinoshita ,et al., Mol.Cel.Proteomics (2006) 5: 749

【使用例：Phos-tag™ 生物素在检测蛋白激酶活性的微阵列（生物芯片）中的运用】

蛋白激酶是很多疾病诊断和药物筛选的靶标。近来有科研人员研发了一种检测胞内蛋白激酶活性的高灵敏度多肽微阵列。用微阵列点样机点样2nL体积的底物多肽溶液，使多肽固定在戊二醛预修饰的高氨基末端载玻片。

当多肽经细胞裂解液磷酸化后，用荧光标记的抗phosphotyrosine（磷酸化酪氨酸）抗体检测酪氨酸激酶，或者用Phos-tag™ 生物素，接着用荧光标记的亲和素检测丝氨酸或者苏氨酸激酶。之后用自动微阵列扫描仪检测荧光信号。多肽微阵列系统包括简单的多肽固定，只需少量样品，具有高密度阵列。重要的是，检测细胞裂解液蛋白激酶活性的灵敏度高。

因此多肽微阵列系统可用于高通量筛选细胞内激酶活性，可用于药物筛选和疾病诊断。